歯根膜線維芽細胞の走化活性を制御する遺伝子の検索

点击翻译按钮获取中文摘要

本年度の研究計画1.継代数による歯根膜線維芽細胞の走化能の検討患者の同意が得られた健常歯周組織を有するヒトの抜去歯より,歯根膜細胞を分離・調整し,以下の実験に供した。(1)走化能の測定:走化能の測定は48wellマイクロケモタキシスチャンバーを用いて,これまでに調べられている増殖因子(PDGF, bFGF, EGF)について行った。測定は細胞の継代を行うごとに実施し,継代数にともなう走化能の変化を調べた。(2)テロメア長の測定:各継代数の細胞を固定してDNAを抽出し,サザンハイブリダイゼーションにてテロメア長を測定し,走化能との相関関係を比較検討した。2.細胞周期制御遺伝子の発現と走化能の関係(1)cDNAライブラリーの構築:継代数の異なる細胞および遊走した細胞と遊走しない細胞のmRNAを,oligo(dT)-magnetic beadsに吸着させ微量高速冷却遠心機にて回収する。これらmRNAから逆転写酵素を用いて(-)鎖cDNAライブラリーを構築する。(2)細胞周期制御遺伝子の検索:細胞の孝化に伴いその発現の上昇が知られているp16,p21およびサイクリンD1,さらにc-fosについて,各継代数の遊走した細胞と遊走しない細胞でのmRNAの発現をPCR法を用いて調べる。結果(1)培養歯根膜細胞の走化能は,調べた5被験者のうち3被験者についてはいずれの増殖因子においても9継代から著明に低下した。残りの2被験者については12継代まで著明な変化はなかった。(2)テロメア長については,継代数を経る毎に長さは短くなっていったが,走化能との相関関係は認められなかった。(3)c-DNAライブラリーを構築し保存した。遺伝子の検索については現在進行中である。