歯周組織再生をめざした遺伝子治療のための基礎的研究

牙周组织再生基因治疗基础研究

• 批准号: 12771323
• 负责人: 池澤 一彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771323/
• 关键词: 歯周組織; 歯根膜細胞; 組織再生; IGF-1; b-FGF; 遺伝子導入; 増殖分化機構; MAPキナーゼ; IGF-I

平成13年度は、前年度に引き続きヒト歯根膜由来細胞のヒトパピロマウイルスtype16E6E7のベクターにより不死化させた細胞株を用いて、ヒトIGF-1遺伝子をエレクトロポレーション法にて遺伝子導入し、選択培地により選択しIGF-1発現株の樹立を試みた。しかしながら、継代を重ねることによりIGF-1の発現量が著しく低下した。また、不死化する前の親株を用いてIGF-1遺伝子の一過性の強発現株の樹立も試みたが、十分なIGF-1の内因性の発現を確認できる細胞株の樹立には失敗した。そこで、マウス歯根膜由来細胞から高いアルカリフォスファターゼ活性を指標に以前に樹立されたクローン細胞株MPDL22を用いてヒトIGF-I遺伝子の導入を同様の方法で行い選択培地で選択し、IGF-I発現株の樹立に成功した。そこでこの細胞株を用いて、IGF-IやFGF-2の外因性のパラクライン刺激による増殖、分化に対する影響を検討した。その結果、増殖期においてはIGF-I発現株はコントロール株に比較して、FGF-2刺激により有意に強い増殖反応を示した。さらに、分化期においてはIGF-I発現株がコントロール株に比して高いアルカリフォスファターゼ活性を示した。そこで現在、この内因性のIGF-Iと外因性のFGF-2との増殖における協調作用のメカニズムを解明するため、シグナル伝達物質のうちIGF-IとFGF-2による刺激にそれぞれ特異的なIRS-1、FRS-2の活性化の程度とその活性の持続時間を見るとともに、これらのシグナルの合流するMAPキナーゼの活性化のパターンについて検討中である。

2001年，在上一年之后，使用人类IGF-1基因使用由人乳头瘤病毒型16E6E7的载体永生的细胞系，人类牙周膜型衍生细胞，然后进行电穿孔，然后使用人类IGF-1表达的菌株来建立IGF-1表达菌株。但是，重复的段落显着降低了IGF-1的表达水平。此外，我们试图在永生之前使用母体菌株建立一种瞬态，强烈表达IGF-1基因，但未能建立一个细胞系，该细胞系可以证实IGF-1的足够内源性表达。因此，使用先前建立的克隆细胞系MPDL22引入了人IGF-1基因，该基因基于小鼠牙周韧带细胞的高碱性磷酸酶活性，使用相同的方法使用选择性培养基选择细胞，并成功地确定了IGF-I表达菌株。因此，使用该细胞系，我们研究了IGF-I和FGF-2对外源旁分泌刺激对增殖和分化的影响。结果，在增殖阶段，与对照菌株相比，在刺激FGF-2时，表达IGF-I的菌株在刺激FGF-2时显示出明显更强的增生反应。此外，在分化阶段，IGF-I表达菌株比对照菌株表现出更高的碱性磷酸酶活性。 Therefore, in order to elucidate the mechanism of cooperative action in the proliferation of endogenous IGF-I and exogenous FGF-2, we are currently looking at the degree of activation and duration of activation of IRS-1 and FRS-2, which are specific to stimulation by IGF-I and FGF-2, among the signal transducers, and also examine the pattern of activation of MAP kinases where these signals converge.

项目成果

池澤 一彦(共著): "歯周病ー新しい治療を求めて"先端医療技術研究所. 7/536 (2000)

池泽和彦（合著者）：“牙周疾病 - 寻找新的治疗方法”先进医疗技术研究所 7/536 (2000)。

池澤一彦(共著): "歯周病-新しい治療を求めて"先端医療技術研究所. 7/536 (2000)

池泽和彦（合著者）：“牙周疾病 - 寻找新的治疗方法”先进医疗技术研究所 7/536 (2000)。