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BACを用いたGTPシクロヒドロラーゼI変異疾患の変異同定系の確立

利用BAC建立GTP环水解酶I突变病突变鉴定系统

基本信息

批准号：
12771458
负责人：
稲垣秀人
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は前年度に引き続き以下の研究を遂行した。GTPシクロヒドロラーゼI(GCH1)遺伝子欠損患者1名の解析では、遺伝子の全域をカバーするように設定した9つの領域の計60kbをLONG-PCR法により増幅し、その断片をエンハンサートラップ法を用いてプロモータ活性を変化させる領域を探索した。当初の目標ではalleleによる発現量の差の検出が期待されたがこの患者では見つからなかった。しかしその過程で2領域中に新規のエンハンサー活性と1領域に抑制性配列を有することを発見できた。これらの活性を持つ領域を今後同定することにより、GCH1の発現制御機構の新たな側面が明らかになると共に、神経系と免疫系における発現制御のクロストークについて知見が得られるものと期待される。GCH1優性変異疾患のDRD患者1名の解析については、20kbの領域の塩基配列を決定したところおよそ30塩基の多型を検出した。そのうち上記のエンハンサー領域にも多型がいくつか含まれていることから遺伝子の発現量に影響する可能性がある。また健康なコントロールとの比較により、日本人特有の多型を有するalleleの存在が強く示唆された。これらの多型の解析については今後さらに研究を進めていく計画である。以上の変異や多型が発現制御に関わるかどうかを最終的に判断する系の確立については、BACを用いていくつかのコンストラクションを試みたが、最終的にはBACクローンのサイズを小さくして従来の方法を用いるのが確実であると判断し、アッセイベクターの構築を行っている最中である。以上の研究成果は早急に結論をまとめ論文として投稿する予定である。

This year, the following research has been carried out compared with the previous year. The analysis of 1 case of GTP gene deficiency and the whole domain of GTP gene deficiency were set up to explore the domain of GTP gene deficiency activity by LONG-PCR method. The domain of GTP gene deficiency was 60kb. The original goal is to find out the difference between the number of patients and the number of patients. The new regulation in the 2 fields and the new regulation in the 1 field The activity of GCH1 is maintained in the same field in the future. The new bottom of GCH1 's development control mechanism is clear and common, and the development control mechanism of the nervous system and immune system is known and expected. Analysis of 1 DRD patient with GCH1 heteromorphic disease and determination of gene alignment in 20kb domains The probability of the occurrence of multiple types in the domain of the gene is high. The existence of an allele unique to the Japanese population is a strong indication of the health of the population. The analysis of multiple types of data is expected to advance in future research. The above two types of heteromorphic development control system related to the determination of the final system, the use of BAC in the middle of the test, the final BAC in the middle of the method of use, the determination of the final system, the construction of the most important. The above research results are urgent and the paper is scheduled to be submitted.