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十字架型DNAを利用した安全な遺伝子治療ベクターの開発

使用十字形 DNA 开发安全的基因治疗载体

基本信息

批准号：
16710148
负责人：
稲垣秀人
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16710148/
关键词：
パリンドローム遺伝子導入

项目摘要

ヒトの転座切断点に位置するATに富んだパリンドローム配列(PATRR)を用いて人工的な転座を起こす系を確立するため、1)その反応に必要な分子が体細胞に存在するか、2)PATRR配列が生体内で立体構造をとりうるのかの二点について研究を進めた。まずヒトの培養細胞にPATRR配列を含むプラスミドを二種類導入し、その間でDNA再構成(転座)が起こるかを確認した。PCRで特異的に増幅する系を用いたところ、高頻度でヒトの転座に類似する再構成反応を検出した。この再構成は切断点に相同性がほとんど見られないことから、二つのDSB間で非相同末端結合でつながったものと考えられた。このことから、PATRR配列を介した転座はヒトの体細胞にて効率よく再現されることが明らかになった。よって転座誘発系に必要な因子は体細胞にすべて含まれていると考えられ、遺伝子治療への応用に一歩近づくことができた。次にこの転座様再構成の原因を明らかにすべく、PATRR配列の立体構造との関連を調べた。プラスミド上のPATRR配列は通常の単離法では十字架型の立体構造をとる。そこで、通常よりも緩やかな条件でプラスミドを精製後、超らせんのねじれを酵素処理で除去した。これにより、PATRRは立体構造をとらなくなる。この状態のDNAを用いて先の実験をおこなったところ、DNA再構成の頻度が非常に減少した。このことはDNAの立体構造が再構成の原因であることを示している。ヒトのゲノム安定性はこのDNAの立体構造、いわゆる非B型DNAの形成と密接に関連していることは推定されていたが、直接の証明をされていなかった。今回のこの結果はその証明になり、非常に重要な成果である。以上二点の研究成果から、安全な遺伝子治療の実用化に向け一定の成果を得ることができたと考えている。今年度の成果は第11回国際人類遺伝学会、第56回アメリカ人類遺伝学会にて発表し、論文としてまとめた。

The position of the cleavage point of the receptor is determined by the use of artificial receptor alignment (PATRR). 1) The necessary molecules exist in somatic cells. 2)PATRR alignment is studied in vivo. PATRR alignment in cultured cells was confirmed by two kinds of DNA reconstitutions, one by one. PCR is specific to increase the amplitude of the system, high frequency of the system, similar to the composition of the system. The identity of this recombination is not the same as that of the cut point, and the non-identical end combination between the two DSB is not the same. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with me. The essential factors for the development of gene expression systems are the development of gene expression systems in somatic cells. Second, the reasons for the re-formation of the base are clearly stated, and the relationship between the three-dimensional structure and PATRR arrangement is adjusted. The PATRR arrangement on the top surface is different from the usual separation method and the three-dimensional structure of the cross type. After purification, enzyme treatment is usually carried out to remove the impurities. This is a three-dimensional structure of PATRR. The frequency of DNA recombination has been greatly reduced. The reason why the three-dimensional structure of DNA is reconstructed The stability of the DNA is determined by the three-dimensional structure, the formation and close connection of non-B-type DNA, and the direct proof. The results of this review prove that it is a very important achievement. With the research results of the above two points, certain results will be achieved towards the practical application of safe genetic therapy. This year's achievements are the 11th International Society for Human Heritage, the 56th International Society for Human Heritage, and the 56th International Society for Human Heritage.