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甲状腺癌特異的核内蛋白のNTT法によるスクリーニング

使用 NTT 方法筛选甲状腺癌特异性核蛋白

基本信息

批准号：
12771474
负责人：
高野徹
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771474/
关键词：
Thyroid Carcinoma NTT mRNA Nuclear Protein Gen Expression Profile Thyroid carcinoma

项目摘要

甲状腺腫瘍における核内蛋白の遺伝子発現プロフィールを作成するために、正常甲状腺組織、甲状腺乳頭癌、甲状腺未分化癌各1例より抽出したmRNAよりプラスミドcDNAライブラリーを作成した。大腸菌に導入した後、固相にて一回増幅して大量の高純度のプラスミドを回収し、制限酵素処理にてインサートの部分のみ精製した後、酵母に導入するためのプラスミドベクター(pNS)に結合させた。このプラスミドにNLSを持つ核内蛋白のcDNAが挿入されている場合は、プラスミドを導入された酵母は選択培地中での増殖能力を持つことになる。最初に大腸菌に導入してpNSのライブラリーを増幅させた後精製し、核内蛋白をコードする遺伝子を含むプラスミドのみを選別するため、酵母に導入し選択培地で培養した。2週間後にコロニーを形成したクローンを回収した。この工程を繰り返すことで各組織型に対して400個、計1200個のクローンを得ることができた。一部のクローンに対して、プラスミドを精製し、塩基配列解析を行った結果、半数程度が未知の遺伝子であったが、elongation factor I、c-FOSなど核に局在すると考えられる遺伝子の配列が含まれていた。今後、各クローンよりプラスミドを精製し、DNAアレイを作成して各甲状腺腫瘍組織における遺伝子発現プロフィールの作成をする予定であるが、現時点では配分された予算内で信頼性のあるアレイを作成することは困難であり、来年度以降の課題としたい。

The gene expression of nuclear protein in goiter was extracted from normal thyroid tissue, papillary thyroid carcinoma and undifferentiated thyroid carcinoma. After the introduction of Escherichia coli, the solid phase was increased, a large number of high-purity proteins were recovered, and the enzyme treatment was limited. After the purification of some of the proteins, yeast was introduced, and the protein was combined with pNS. The expression of NLS in yeast cells was detected by PCR. The expression of NLS was detected by PCR. The initial introduction of E. coli into the genome, amplification, purification, and selection of nuclear proteins, yeast introduction, and culture 2 weeks later, I'm back. 400 tissue types, totaling 1200 tissue types A part of the results of the analysis of the base alignment, half of the results of the analysis of the base alignment, half of the In the future, each goiter will be refined, DNA will be prepared, and each goiter tissue will be prepared according to the predetermined conditions. At present, it will be difficult to divide and calculate the information in the goiter tissue in the future.