改良型SAGEによる甲状腺濾胞癌特異的遺伝子の大量スクリーニング

使用改进的 SAGE 对滤泡性甲状腺癌特异性基因进行大规模筛查

• 批准号: 13216068
• 负责人: 高野 徹
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216068/
• 关键词: Thyoid carcinoma; mRNA; SAGE; Gene Expression Profile; RT-PCR

甲状腺濾胞癌、濾胞腺腫の間で発現量に差のある遺伝子をスクリーニングするためHigh-throughput Differential Screening by SAGE (HDSS)を以下の手順でおこなった。1.甲状腺濾胞癌(widely invasive type)濾胞腺腫(normofollicular type)の新鮮凍結標本よtotal RNAを抽出した。2.改良型SAGE法を用いてそれぞれのmRNA由来のtagを各10000個以上解析し、遺伝子発現プロフィールを作製した。3.両者の遺伝子発現プロフィールを比較し、どちらか一方で発現が無い遺伝子配列を、発現量の多い順にリストアップし、それぞれに対応する40個の18merの5'プライマーを作製した。4.real-time quantitative RT-PCRによる2次スクリーニング3'プライマーとしてpolyAアンカープライマーを使用した。ただし、プライマーのデザインは5'-CGCGCGT13VNの12通りとし、Tagが検出された組織(濾胞癌、濾胞腺腫のいずれか)のRNAを用いて5'プライマーとセットでRT-PCRをかけ、最も増幅効率の良かったものをスクリーニング時の3'プライマーとして選択した。選択されたプライマーセットを用い、SYBR Greenの蛍光をモニターすることで濾胞癌、濾胞腺腫各4検体づつの組織からのmRNAを用いてreal-time quantitative RT-PCRを行い、SAGEで検出された発現量の差の再現性を確認した。40個の候補遺伝子のうち1個で明らかな差がみとめられた。この遺伝子は甲状腺濾胞癌の分子的診断のクライテリアとして使用できるものと考えられ、今後さらに解析を進める予定である。

Thyroid filter carcinoma, filter adenomas, and the amount of time between the occurrence of High-throughput Differential Screening by SAGE (HDSS) 1. Total RNA was extracted from freshly frozen thyroid cysts of the widely invasive type. 2. The modified SAGE method was used to analyze more than 10000 tags of mRNA origin and to control the expression of mRNA. 3. The number of 18-mer 5-mer 5 4.Real-time quantitative RT-PCR is used for 2 times. 5'-CGT 13VN and 12-channel RT-PCR using Tag to detect RNA from tissues (filter carcinomas, filter adenomas, etc.). 3'-CGCGT 3 VN and 12-channel RT-PCR using Tag to detect RNA from tissues (filter carcinomas, filter adenomas, etc.) The reproducibility of real-time quantitative RT-PCR and SAGE detection was confirmed by using real-time quantitative RT-PCR and real-time quantitative RT-PCR of mRNA from tissue samples of 4 different tissues of filter carcinoma and filter adenoma. 40 candidates, 1 candidate, 1 candidate, 1 candidate 1 candidate 1 candidate 1 The molecular diagnosis of thyroid carcinoma is based on the analysis of the gene.

项目成果

Takano T, et al.: "Cancer-specific mRNA in thyroid carcinomas : Detection, use, and their implication in thyroid carcinogenesis"Endocrine Journal. (in press). (2002)

Takano T 等人：“甲状腺癌中的癌症特异性 mRNA：检测、使用及其在甲状腺癌发生中的意义”内分泌杂志。