真核生物DNA複製における体細胞相同組換えの役割

本研究では材料として分裂酵母を用い、特にその接合型変換を複製と組換えの共役現象のモデルととらえて、相同組換えがDNA複製の過程において果たす役割を明らかにすることを目的とする。このために、相同組換えに関与する遺伝子の条件変異を利用して、細胞周期やDNA複製との関連を遺伝学的手法、細胞生物学的手法により解析する。これと共に、相同組換え関連遺伝子と相互作用を示す遺伝子変異を実験的に検索することにより、複製との共役現象に関わる新たな因子の同定をめざす。本年度の研究では、前年度に得られたrhp51遺伝子の温度感受性株(h^<-S>)を用いて、G1/S期で同調した後に制限温度でリリースし、同遺伝子のS期における役割について検討した。その結果、S期の進行が遅延していることが示唆された。この点について接合型変換座位の存在する2番染色体の複製をパルスフィールド電気泳動によりモニターすることを計画したが、この準備段階において、当初作成した温度感受性株に問題があることがわかり、その解決を試みているが、現在まで成功にいたっていない。これと平行して、rhp51遺伝子とともに複製フォークの再生に関与する遺伝子の候補としてデータベース中により見い出した出芽酵母SRS2遺伝子ホモログ(以下、srs2)の解析を行った。その結果、srs2遺伝子の単独欠損株はUVやMMSに対して感受性を示すこと、またsrs2遺伝子はDNA複製に関与するDNAポリメラーゼの遺伝群、及び一部のチェックポイント遺伝子群と強い遺伝的相互作用を示すことが明らかになり、複製フォーク進行、再生過程への関与が示唆された。

本研究では材料として分裂酵母を用い、特にその接合型変換を複製と組換えの共役現象のモデルととらえて、相同組換えがDNA複製の過程において果たす役割を明らかにすることを目的とする。このために、相同組換えに関与する遺伝子の条件変異を利用して、細胞周期やDNA複製との関連を遺伝学的手法、細胞生物学的手法により解析する。これと共に、相同組換え関連遺伝子と相互作用を示す遺伝子変異を実験的に検索することにより、複製との共役現象に関わる新たな因子の同定をめざす。本年度の研究では、前年度に得られたrhp51遺伝子の温度感受性株(h^<-S>)を用いて、G1/S期で同調した後に制限温度でリリースし、同遺伝子のS期における役割について検討した。その結果、S期の進行が遅延していることが示唆された。この点について接合型変換座位の存在する2番染色体の複製をパルスフィールド電気泳動によりモニターすることを計画したが、この準備段階において、当初作成した温度感受性株に問題があることがわかり、その解決を試みているが、現在まで成功にいたっていない。これと平行して、rhp51遺伝子とともに複製フォークの再生に関与する遺伝子の候補としてデータベース中により見い出した出芽酵母SRS2遺伝子ホモログ(以下、srs2)の解析を行った。その結果、srs2遺伝子の単独欠損株はUVやMMSに対して感受性を示すこと、またsrs2遺伝子はDNA複製に関与するDNAポリメラーゼの遺伝群、及び一部のチェックポイント遺伝子群と強い遺伝的相互作用を示すことが明らかになり、複製フォーク進行、再生過程への関与が示唆された。