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cキナーゼ基質タンパク質のカルモジュリン結合ドメインを介した機能制御の解明

通过钙调蛋白结合域阐明 c-激酶底物蛋白的功能调节

基本信息

批准号：
12780481
负责人：
松原守
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780481/
关键词：
カルモジュリンリン酸化ミリスチル化 PKC シグナル伝達 Cキナーゼ

项目摘要

本研究では、CaM結合ドメインを持つCキナーゼ基質タンパク質としてMARCKS、NAP-22、eNOSをとりあげ、Cキナーゼ、CaM、酸性リン脂質との相互作用やこれらの因子による機能制御を生化学的手法ならびに構造生物学的の両面から解明する。これまでMARCKSやNAP-22について、CaMとの結合様式がこれまでのCaM結合タンパク質とは構造的に異なっていることを明らかにしてきたので、このことを分子レベルで明らかにするために、CaMとこれらタンパク質のCaM結合ドメインペプチドとの複合体の立体構造をX線結晶構造解析を行っている。本年度の成果として昨年に構造解析に成功したNAP-22のCaM結合領域であるN末端のミリスチル化ドメインとCaMとの複合体の構造の精密化を行った。その結果、興味深いことに、ミリスチル基がCaMのN末、C末ドメインから形成される疎水性のトンネルの中をまっすぐに貫通しており、主に疎水性相互作用で蛋白質間の認識を行っていた。この結果は直接ミリスチル基が蛋白質間相互作用に関与していることを示した最初の例である。今後この構造結果を基により詳細な相互作用実験を行う予定である。また、現在、他のCキナーゼ基質タンパク質であるMARCKSやeNOSのCaM結合ドメインについても同様に結晶化実験を開始し、良好な結晶を得ることに成功している。

In this study, the interaction of CaM, CaM and acidic lipids, the functional control of these factors, the biochemical approach, and the structural biology approach were investigated. For example, MARCKS, NAP-22, CaM, and CaM are bound to each other. For example, X-ray crystallographic analysis of the three-dimensional structure of CaM, CaM, and CaM complexes. The results of this year's structural analysis were successful in the N-terminal transformation of NAP-22 CaM complexes and the structural refinement of CaM complexes. As a result, there is a deep interest in the formation of CaM and CaM, and the formation of CaM and CaM in the formation of CaM and CaM. The results show that protein interaction is directly related to protein interaction. Future structural results are based on detailed interactions. The crystallization process started successfully with good crystallization.