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新規神経機能調節ペプチドCox17pの視床下部における生理的役割

新型神经元功能调节肽 Cox17p 在下丘脑中的生理作用

基本信息

批准号：
12780595
负责人：
加香孝一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度はGST-Cox17pを用いて、Cox17p 1分子に対し約2.5原子の銅イオンが結合すること、またこの結合には分子内の-KPCCVC-配列中のシステイン残基が必須であることを明らかにした。今年度は、大腸菌ではなくB.brevisを宿主として組み換えヒトCox17pペプチドを大量に発現・精製し、その生化学的性質を詳細に解析した。その結果、Cox17pは銅、ニッケル、亜鉛、マンガン、カドミウム、コバルトの6種の重金属のうち銅に最も親和性を示すこと、さらに還元条件下でCox17p 1分子につき約3原子の銅を結合すること、またこの銅との結合はpH4〜7.5まで維持され、これよりも酸性または塩基性で急激に結合が失われることなどが新たに明らかとなった。一方、昨年度作成したCOX17遺伝子欠失をヘテロにもつ個体同士を交配したが、COX17遺伝子欠失をホモにもつ個体は生まれず、胚性致死であることが確認された。そこで、胚のどの時期で致死に至るのかを追跡した。その結果、6.5日胚にはCOX17遺伝子欠失をホモにもつ個体が存在するが、それ以降の胚は急速に退縮し胎生8.5〜10の間で致死となっていることがわかった。さらに6.5日の胚において野生型及びヘテロの胚はチトクロムc酸化酵素(CCO)活性を示すのに対し、ホモと思われる個体ではその活性が消失していた。これに対し、ホモ胚のコハク酸脱水素酵素活性やCCOを構成する他のCOXサブユニットの発現には異常が認められなかったことから、Cox17pが欠失した結果、ミトコンドリアへの銅の輸送が阻害されCCO活性が消失したことが判明した。また、ホモ胚の解糖系も正常であったことから、胎生6.5日までは一般に電子伝達系に非依存的に胚発生が進行することが明らかとなった。

Last year, GST-Cox 17p was used, Cox 17p 1 molecules were associated with about 2.5 atoms of copper, and the binding of copper residues in intramolecular-KPCCVC-alignment was necessary. This year, E. coli was found in large quantities, refined, and analyzed in detail for its biochemical properties. The results show that Cox 17p 1 molecule binds to copper at about 3 atoms under reductive conditions, and the binding of copper to copper is maintained at pH 4 ~ 7.5, and the binding of copper to copper is maintained at pH4 ~ 7.5. A party, last year made COX17 gene missing, individual mating, COX17 gene missing, individual reproduction, embryonic death, identification The time of death and the time of death. As a result, 6.5 days after birth, COX17 was lost, and the individual was present. However, the embryo was rapidly withdrawn from birth, and the fetus was killed between 8.5 and 10 days. The activity of CCO was shown to be absent in wild type and wild type individuals on day 6.5. The CCO activity of the enzyme was determined by the presence of COX-17 and the inhibition of copper transport. The embryo's sugar release system is normal, and the embryo is born on 6.5 days. The electron transfer system is independent of the embryo development.