新規な銅シャペロン(PPOシャペロン)遺伝子の探索と機能解析

新型铜伴侣（PPO伴侣）基因的搜寻及功能分析

• 批准号: 17651117
• 负责人: 中山 亨
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17651117/
• 关键词: 植物二次代謝; ポリフェノールオキシダーゼ; キンギョソウ; オーロン; シャペロン; 取り込み; 酵母; 銅; 相互作用; 二次代謝; フラボノイド; キレート; 酵素; タンパク質

キンギョソウの花弁の色の違いによるcDNAライブラリーの差し引き(黄色-白色)により単離した多数の黄色花弁特異的cDNAについて塩基配列を決定した.その塩基配列からそのcDNAの機能を推定するとともに,有望とされたクローンについては大腸菌の菌体内で大量発現させた.一方,黄色キンギョソウのオーレウシジンシンターゼAmAS1遺伝子をベイトとして,酵母Two-hybrid法によりAmAS1と相互作用する可能性のあるタンパク質をコードする遺伝子の数々をキンギョソウ花弁cDNAライブラリーから探索した.その結果,以前の研究でも銅シャペロンと推定されたタンパク質AmDDを含むcDNAが単離された.AmDDのアミノ酸配列解析により,54-110位および136-178位の2ヶ所にheavy metal associated domainの保存配列とよく一致する領域が存在することが分かった.このことから,AmDDがCuを結合してのAmAS1への取り込みを補助し,AmAS1の活性化に関与する銅シャペロン(PPOシャペロン)どして機能する可能性が示唆された.次いで,AmDDの機能を生化学的に証明するため,この遺伝子を酵母細胞内でaureusidin synthase遺伝子と共発現させた.形質転換酵母細胞の細胞抽出液についてテトラヒドロキシカルコンを基質としてaureusidin synthase活性をアッセイした.しかしながら予想に反して細胞抽出液中にぽ有意な同酵素漕性は見いだされなかった.以上の結果から,AmAS1への銅の取り込みにはAmDD以外の因子の関与についても検討する必要があると考えられた.

Color, cDNA, color, color, It is expected that a large number of bacteria can be detected in the body of pathogenic bacteria due to the fact that the cDNA mechanism can be used to determine whether there is a significant increase in the number of bacteria. On one side, there is a possibility of interaction between AmAS1 and yeast Two-hybrid. The possibility of interaction is different from that of yeast. The possibility of interaction is different from that of yeast Two-hybrid method. According to the results of the previous study, it was presumed that the AmDD contained an cDNA cluster in the previous study. Amdd acid configuration analysis showed that there were significant differences in the field of heavy metal associated domain preservation and allocation in the 54-110th position and the 2nd position. This is not true. AmDD Cu combined with AmAS1 to obtain information about the availability of assistance, and the activation of AmAS1 and the possibility of instigating the possibility of failure. In the second half of the experiment, the AmDD machine was able to detect the biochemical properties of the yeast, and the intracellular aureusidin synthase cells of the yeast were detected in total. The yeast cell extract, the cell extract, the yeast cell extract, the yeast cell extract, the cell extract, the cell extract, the I would like to know that I am interested in the same enzyme in the cell extract. The above results show that AmAS1 is responsible for the selection of factors other than AmDD.

项目成果

Amperometric detection of the bacterial metabolic regulation with a microbial array chip.

• DOI: 10.1016/j.bios.2004.08.039
• 发表时间: 2005-07
• 期刊: Biosensors & bioelectronics
• 影响因子: 12.6
• 作者: K. Nagamine;Nobuto Matsui;T. Kaya;T. Yasukawa;H. Shiku;T. Nakayama;T. Nishino;T. Matsue

Localization of a flavonoid biosynthetic polyphenol oxidase in vacuoles

• DOI: 10.1111/j.1365-313x.2005.02625.x
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: PLANT JOURNAL
• 影响因子: 7.2
• 作者: Ono, E;Hatayama, M;Nakayama, T
• 通讯作者: Nakayama, T

Yellow flowers generated by expression of the aurone biosynthetic pathway

• DOI: 10.1073/pnas.0604246103
• 发表时间: 2006-07-18
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Ono, Eiichiro;Fukuchi-Mizutani, Masako;Tanaka, Yoshikazu
• 通讯作者: Tanaka, Yoshikazu

Menaquinone-specific prenyl reductase from the hyperthermophilic archaeon Archaeoglobus fulgidus

• DOI: 10.1128/jb.187.6.1937-1944.2005
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: JOURNAL OF BACTERIOLOGY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Hemmi, H;Takahashi, Y;Nishino, T
• 通讯作者: Nishino, T

UDP-glucuronic acid:anthocyanin glucuronosyltransferase from red daisy (Bellis perennis) flowers -: Enzymology and phylogenetics of a novel glucuronosyltransferase involved in flower pigment biosynthesis

• DOI: 10.1074/jbc.m410537200
• 发表时间: 2005-01-14
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Sawada, S;Suzuki, H;Nakayama, T
• 通讯作者: Nakayama, T