末梢血単核球中薬物濃度解析による肝臓中CYP2C19活性の予測

通过分析外周血单个核细胞中的药物浓度预测肝脏CYP2C19活性

• 批准号: 15H00487
• 负责人: 高橋 理充
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H00487/
• 关键词: CYP2C19; 個人差

近年、多くの研究により薬物代謝酵素の遺伝子多型が薬物の効果や副作用の個人差に影響することが明らかになってきた。しかし、CYP2C19は肝臓での発現量に大きな個人差が存在するため、遺伝子多型に基づく酵素活性の変化のみでは薬物の効果や副作用発現に関する個人差を十分に説明することはできないと考えられている。本研究では、末梢血単核球におけるCYP2C19のmRNAやタンパク量とCYP2C19基質内服時の未変化体/代謝物比の関係性を評価することで、肝臓内のCYP2C19の発現量を予測し、CYP2C19の遺伝子多型による酵素機能の変化のデータと合わせてより詳しくCYP2C19の酵素活性を予測することを目的とした。まず、CYP2C19の遺伝子多型の解析方法と末梢血単核球のCYP2C19 mRNA量の測定方法を構築した。日本人ではCYP2C19*1、2、3、17が99%以上を占めるため、これらの多型を制限酵素断片長多型分析法で測定した。CYP2C19*2、3、17のSNPを含む領域をPCRで増幅し、それぞれ制限酵素であるSma I、BamH I、Mnl Iで処理した。切断の有無で遺伝子型を判定することができた。次にmRNAを定量するために採取した血液より分離した単核球からtotal RNAを抽出し、逆転写反応後にPCRを行うことで、CYP2C19 mRNAの発現を確認した。現在、臨床検体での測定を進めている。今後、末梢血単核球のCYP2C19タンパクの発現確認・定量と、オメプラゾール投与後の血漿中オメブラゾール、オメプラゾールスルフォンおよび5'-ヒドロキシオメプラゾールの液体クロマトグラフータンデム型質量分析計による測定を行う。その後、末梢血単核球におけるCYP2C19のmRNAやタンパク量とCYP2C19基質内服時の未変化体/代謝物比の関係性の評価を行う。

In recent years, there has been a lot of research on the effects of different types of enzymes on the metabolism of drugs and side effects. CYP2C19 has a large individual difference in the amount of liver protein produced, which is explained by the individual difference in the activity of enzymes and the occurrence of side effects due to gene polymorphism. The purpose of this study was to evaluate the relationship between CYP2C19 mRNA levels in peripheral blood and CYP2C19 matrix metabolite/metabolite ratios when administered orally, to predict CYP2C19 production in the liver, and to predict CYP2C19 enzyme activity in the liver. A method for analyzing CYP2C19 gene polymorphism and a method for measuring CYP2C19 mRNA in peripheral blood lymphocytes were constructed. Japanese CYP2C 19*1, 2, 3, 17 more than 99% of the total number of CYP2C 19* 1, 2, 3, 17 CYP2C19 *2, 3 and 17 SNPs were amplified by PCR and restricted by Sma I, BamH I and MnI. To determine the presence or absence of a sub-type The expression of CYP2C19 mRNA was confirmed by PCR after mRNA quantification and isolation. Now, the clinical examination of the body to determine the progress. In the future, CYP2C19 protein detection in peripheral blood mononuclear cells was confirmed, quantified, and measured by plasma mass spectrometry after administration. To evaluate the relationship between CYP2C19 mRNA levels and CYP2C19 matrix metabolites/metabolites ratios in postnatal and peripheral blood mononuclear cells.