樹状細胞療法治療効果予測のための抗Mesothelin抗体ELISA測定法の構築

构建预测树突状细胞疗法治疗效果的抗间皮素抗体ELISA测定方法

• 批准号: 17H00595
• 负责人: 石川 伸介
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00595/
• 关键词: 樹状細胞療法; 抗Mesothelin抗体; ELISA

Mesothelin(MSLN)陽性がん患者の血清中抗MSLN抗体価が、MSLNを標的とした樹状細胞療法の治療効果予測因子になるかという予測のもとに、血清中MSLN抗体価測定法を構築した。ヒトMSLN蛋白(Glu296-Gly580)をマイクロプレートに固相化し, 検体中の抗MSLN抗体・二次抗体としてHRP標識抗免疫グロブリン抗体を反応させ、TMB基質システムを用いたELISA測定系の条件検討をした。抗原固相化濃度は2～5μg/mLを検討し、いずれも検量線の250ng/mLまで直線性が認められたため2μg/mLとした。標準物質用二次抗体(HRP標識Anti-Mouse IgG)の希釈倍率及び発色時間は、直線性が最も安定していた2000倍で6分間、検体用二次抗体(HRP標識Anti-Human IgG Fc)の希釈倍率は50000倍に設定した。この条件下で健常人3名、膵臓がん3名を用いて検体の希釈倍率を5～200倍で検討し、2群における差が明瞭となった100倍を採用した。低、中、高濃度検体の同時再現性(n=10)は、それぞれCV(%)が30.8、23.3、7.5となり、低濃度ほどばらつきがみられた。同一検体を用いたバッチごとの再現性(n=5)は、CV(%)が25.2、69.5、21.3と中濃度において大きなばらつきが認められた。健常人21名、肺がん8名、膵臓がん7名のMSLN抗体価を測定したところ、肺がん群では健常人群に比して抗体価が高く、Steel-Dwass法により明らかに有意差を認めた(p<0.05)。一方膵臓がん群においては健常人群と比して抗体価が高い傾向は認められたが、有意差は認められなかった(p=0.08)。以上より、さらに改良の必要はあるが、MSLN抗体価の測定が可能となり、肺がん群では健常人群に比較してMSLN抗体価が高いことが示された。

To construct an assay for anti-MSLN antibodies in serum from Mesothelin(MSLN) positive patients and MSLN target patients. MSLN protein (Glu296-Gly580) was isolated from the serum by solid-phase method. The anti-MSLN antibody, secondary antibody and HRP labeled anti-MSLN antibody were detected by ELISA. Antigen solid-phase concentration is 2~5μg/mL, and the detection line is 250ng/mL. The ratio and color development time of secondary antibody (HRP-labeled Anti-Mouse IgG) for standard substance were set to 2000 times and 6 minutes respectively, and the ratio of secondary antibody (HRP-labeled Anti-Human IgG Fc) for sample was set to 50000 times. Under these conditions, 3 healthy people, 3 healthy people, 3 healthy The simultaneous reproducibility of low, medium and high concentration samples (n=10) was 30.8, 23.3 and 7.5 respectively. Reproducibility (n=5), CV(%), CV(%), CV MSLN antibodies were detected in 21 healthy individuals, 8 healthy individuals and 7 healthy individuals, respectively. The levels of MSLN antibodies were higher in healthy individuals than in healthy individuals. Steel-Dwass method was used to detect MSLN antibodies (p<0.05). A group of healthy individuals tended to have a higher tendency to recognize the disease than the antibody group (p=0.08). The above results indicate that the MSLN antibody level is higher than that of healthy individuals.