CBA系マウスの体外受精による受精卵獲得数の向上を目指して

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【目的】新たなゲノム編集技術が普及し、B6系以外の系統でも遺伝子改変マウスを作出することが容易になった。受精卵から生体を得るには、体外受精が不可欠である。B6系で確立された体外受精の方法・条件が、CBA系には不適なため、CBA系の体外受精による受精卵獲得の効率化を目指した。【方法と結果】雌マウスに過排卵処理を行い採卵し、精子と媒精5時間後に正常卵のみを選別した。選別した正常卵は複数の培地を用い、CO2濃度5%で35℃～39℃の各条件下で翌日の午後まで培養した。受精率は2cell数/(選別した正常卵数)で算出した。CBA/Nマウス : 採卵数は1匹あたり25個だった。受精率は35℃で89%、36℃で71%、37℃で73%、39℃で64%だった。ただし、35℃の場合、午前中に1cellだったものが、午後には2cellへと発生した卵が多かった。使用した培地とその受精率は、TYHで73%、HTFで81%、mWMで87%、M16で75%、PB1で53%。CBA/Jマウス : 採卵数は1匹あたり11個だった。受精率は35℃で40%、37℃で55%、38℃で51%、39℃で75%。使用した培地とその受精率は、HTF87%、KSOM77%、mWM60%。【考察】CBA系は、正常卵を選別しても、翌日に変性退行卵が増加するという特徴がある。そのため、本研究の受精率に、一般的な2cell数/(2cell数+未受精卵数)ではなく、2cell数/(選別した正常卵数)を採用した。その結果、CBA/N系は培養温度35℃と培養培地mWM、CBA/J系は培養温度39℃と培養培地HTFの組み合わせで成績が良かった。また、CBAのN系とJ系は、最適培養条件が大きく異なっていた。CBA系はB6系と比べ採卵数が少なく、今後は週齢毎の採卵数を比較検討するなど、効果的な過排卵処理法を検討する必要があると考えている。