日本野生マウス由来MSM系マウスにおける未成熟卵の体外成熟培養と体外受精の試み

日本野生小鼠未成熟卵体外成熟培养及MSM小鼠体外受精试验

• 批准号: 20929026
• 负责人: 前田 宜俊
• 金额: $ 0.37万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20929026/
• 关键词: MSM; Ms; 体外成熟培養; 未成熟卵母細胞

[研究の目的]国立遺伝学研究所の森脇らによって開発されたMSM/Msマウス(以下、MSM)は、静岡県三島市で採取された日本産の野生マウスを起源とするマウスである。MSMは突然変異型の連鎖解析や遺伝子クローニングなどの研究分野において重要な系統と位置付けられている。一般マウスではホルモンを用いた排卵誘起と体外受精により、多数の受精卵を作成することができる。しかしMSMでは排卵を誘起しがたいことから、生殖工学的手法を用いることが困難であり、いまだ実現していない。卵巣内には卵母細胞が多数存在しており、これを利用すれば一度に多数の卵を得られる可能性があることから、本研究ではMSM卵巣内から未成熟卵を採取して体外成熟を試み、さらに体外受精を行い、産仔を得ることを目的とした検討を行なった。[実施内容]最初に体外成熟培養(in vitro maturation,以下IVM)の時間を卵の核凝集の状態を指標に検討した。2.5単位のPMSGを背部皮下に投与し、46～48時間後に卵巣を摘出して卵母細胞を採取した。IVMを行なった後、ラクモイド染色により核を染色した。(以下、実験条件を示すため、PMSG投与から卵巣摘出までの時間をPとする)その結果、体外受精に用いる卵の核と同様に凝集しているものは17時間以上培養することで得られることがわかった。次にIVMにより得られた卵を用いて体外受精を行なった。Pを46～51時間、IVMを13～20時問行なう条件で164頭のMSMから合計752個の2cellを得た。IVM13～19時間における受精率は39.3～55.8%であったが、20時間では28.2%であった。P46～49時間、IVM14～17時間で得られた172個の2cellをmWM培地で培養したが、全く発生が進まなかった。対照実験では2頭の4週齢MCHに同様の処置を行い、2cellを27個、さらにこの胚を20個移植し12頭の産仔を得られた。これに対しMSMでは、体外受精で得られた456個の2cellをMCHマウスに胚移植したが、得られた産仔は16頭であった。[まとめ]IVMを行い、MSMの体外成熟と体外受精、胚移植を試みた。MSMからは、一般マウスのように多数の未成熟卵母細胞を採取することができず、IVMによって得られた2cellは、平均4.6個/頭であった。体外受精を行ない、得られた2cellを培養したが、それ以上発生が進まなかった。胚移植をしても産仔となったのは移植胚総数の3.5%と、低い値であった。MSMにおけるIVM法については、PMSG投与条件の検討も含め、さらなる培養条件の検討が必要であることがわかった。

[Purpose] The National Institute of Genetic Sciences developed MSM/Ms (hereinafter referred to as MSM) and adopted MSM wild species from Japan. MSM is a genetic linkage gene that changes suddenly. It is important to study the system and position. In general, ovulatory induction and in vitro fertilization are used. MSM is not induced to ovulate, reproductive engineering techniques are used, and it is difficult to produce. In this study, MSM was selected for in vitro fertilization and for reproduction. [Implementation] The time of initial in vitro maturation (IVM) and the state of egg nuclear aggregation are discussed. 2.5 PMSG was injected subcutaneously on the back, 46~48 hours later, oocytes were extracted and collected. IVM can be used to stain the nucleus. (The following conditions are shown below: PMSG administration and time of egg extraction; results; in vitro fertilization; egg nuclear isozyme aggregation; culture for more than 17 hours; results; results). In vitro fertilization P = 46~51 hours, IVM = 13~20 hours, total 752 cells The fertilization rate was 39.3~55.8% at 13~19 days and 28.2% at 20 days of IVM. P46~49 time, IVM14~17 time, 172 cells were cultured in mWM, and all cells were cultured in mWM. In contrast, 2 heads of 4-week old MCH were transplanted to 27 embryos from 2 cells and 12 litters from 20 embryos. In vitro fertilization, 456 embryos were obtained. []IVM, MSM in vitro maturation, in vitro fertilization, embryo transfer Most of the immature oocytes were collected from MSM and IVM, with an average of 4.6 oocytes per head. In vitro fertilization is carried out, and the 2cell culture is carried out. 3.5% of the total number of embryos transferred MSM, IVM, PMSG, and culture conditions are discussed.