慢性中耳炎の病態とTLR4との関連

慢性中耳炎病理与TLR4的关系

• 批准号: 17H00648
• 负责人: 松永 崇志
• 金额: $ 0.35万
• 依托单位: Oita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00648/
• 关键词: 慢性中耳炎; インフルエンザ菌; Toll様受容体4

急性中耳炎や滲出性中耳炎の起炎菌は肺炎球菌、インフルエンザ菌、モラキセラ・カタラーリスが主であり、特にインフルエンザ菌は急性中耳炎罹患後に生じる滲出性中耳炎が遷延化する事が知られている。Toll様受容体4(TLR4)領域の遺伝子変異と小児中耳炎発症との関連が報告されており、当科でも急性中耳炎マウスモデルにおいてTLR4変異マウスでは早期細菌クリアランスが障害されることを報告した。しかし、慢性中耳炎の病態とTLR4変異との関連は未だ不明である。本研究では慢性中耳炎におけるTLR4の役割について検討し、慢性化のメカニズムとの関連性を明らかにすることが目的である。C3H/HeJマウス(TLR4変異)とC3H/HeNマウス(WT)を用いて、顕微鏡下での耳管閉塞によるインフルエンザ菌性中耳炎マウスをそれぞれ作成した。3日後、1週間後に中耳貯留液を回収し、チョコレート寒天培地に散布して細菌の生菌数を測定した。3日後の鼓膜所見はC3H/HeJマウス群においてはいずれも白濁し、中耳炎を認めたが、C3H/HeNマウス群の半数は白濁を認めず、中耳炎を認めなかった。中耳貯留液内の生菌数はC3H/HeJマウス群がC3H/HeNマウス群よりも多い結果となった。一方、1週間後の鼓膜所見はC3H/HeJマウス群では33%のマウスにのみ白濁を認め、残る66%には中耳炎は認めなかった。C3H/HeNマウス群の鼓膜所見は全数白濁を認め、いずれも中耳炎であった。生菌数はC3H/HeNマウス群がC3H/HeJマウス群よりも多く、3日後とは異なる結果となった。今後は引き続き採取した中耳粘膜と中耳貯留液よりRNAを抽出し、各種サイトカインに対する定量的RT-PCR法、中耳腔内の組織学的検討、中耳粘膜内のリンパ球に対するフローサイトメトリーによる解析を行う。

急性中耳炎和渗出性冲刺培养基的主要原因是肺炎球菌，流感嗜血杆菌，羊毛乳ha虫和卡塔拉利菌，众所周知，尤其是嗜血杆菌造成的嗜血杆菌培养基，延长了急性鼻炎培养基后发生的渗出性耳炎。据报道，TOLL样受体4（TLR4）区域中的基因突变与小儿中耳炎培养基的发展之间存在联系，在我们的部门中，我们还报告说，在急性耳炎培养基小鼠模型中，TLR4突变小鼠的早期细菌清除率受损。但是，慢性中耳炎和TLR4突变的病理之间的关联仍然未知。这项研究旨在研究TLR4在慢性中耳炎中的作用，并阐明其与慢性发育机制的关联。使用C3H/HEJ小鼠（TLR4突变）和C3H/HEN小鼠（WT）制备了由于显微镜下因尤斯塔克式管梗阻而导致的嗜血杆菌中耳炎的小鼠。三天和一周后，收集了中耳的存储并喷在巧克力琼脂培养基上，以测量活细菌的数量。在C3H/HEJ小鼠组中，三天后的鼓膜结果是多云的，并且观察到了中耳炎，但是C3H/Hen Mice组的一半组没有云层白色，没有耳炎培养基。 C3H/HEJ小鼠中中耳储存液中的活细菌数量高于C3H/HEN小鼠。另一方面，在C3H/HEJ小鼠组的33％中发现了一周后的鼓膜调查结果，其余66％没有发现中耳炎。 C3H/Hen小鼠组中的鼓膜发现表现出云彩白度，所有这些发现都是中耳炎。 C3H/HEN小鼠组的活细菌数量高于C3H/HEJ小鼠组，与3天后的结果不同。将来，将从收集的各种细胞因子，中耳腔内的组织学检查以及中耳粘膜内淋巴细胞的流式细胞仪分析中提取RNA，并从中耳粘膜和中耳储存液中提取RNA和定量RT-PCR。