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定量的標的プロテオミクスを用いた迅速かつ簡便な血中ニボルマブ絶対濃度測定法の開発

利用定量靶向蛋白质组学开发快速、简单的血液纳武单抗绝对浓度测量方法

基本信息

批准号：
18H00408
负责人：
阿部一樹
金额：
$ 0.34万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00408/
关键词：
抗体医薬品 LC-MS/MS プロテオミクス

项目摘要

既存の抗体医薬品分析法では、大量に生成されるペプチド断片によるイオンサプレッションや、抗体医薬品のペプチド消化に長時間かかることが問題となっている。これらの問題によって、LC-MS/MS法を用いた抗体医薬品の臨床応用が困難となっている。そこで本研究では、IgG精製を利用した前処理法によるイオンサプレッションの軽減と、固相化トリプシンを用いた迅速酵素消化による消化時間の短縮を試み、臨床応用可能なLC-MS/MS法によるニボルマブの血中濃度測定法を構築することを目的とした。目的達成のため、まず、質量分析計を用いてニボルマブ特有のペプチド(サロゲートペプチド)の同定、並びにその検出条件を決定した。次に、高速液体クロマトグラフィーを用いてサロゲートペプチドの分離条件を決定した。そして、サロゲートペプチドに対する前処理条件、すなわち、固相抽出条件、ニボルマブの酵素消化条件、血清のIgG精製条件を決定した。固相抽出にはOasis HLBを用いることで、疎水性相互作用を利用したペプチドの抽出が可能であった。ニボルマブの酵素消化にMonoSpin Trypsinを用いることで、20分以内に酵素消化が可能であった。血清のIgG精製にMonoSpin ProGを用いることでイオンサプレッションが軽減し、低濃度域まで測定が可能となった。分析法バリデーションを行った結果、本分析法が妥当と判断できたため、ニボルマブによる治療を受けている患者の血清中ニボルマブ濃度を測定したところ、本分析法が臨床応用可能であることが分かった。本研究では、IgG精製を利用することでイオンサプレッションを軽減させ、固相化トリプシンを用いることで迅速消化を可能とした。また、本測定法が臨床応用可能であることも示された。従って、本研究により定量的標的プロテオミクスを用いた迅速かつ簡便な血中ニボルマブ絶対濃度測定法が構築された。本測定法は他の抗体医薬品分析にも応用可能と考えられた。

Existing antibody medical drug analysis methods have many problems such as the large number of fragments generated and the long time required for the digestion of antibody medical drugs. The LC-MS/MS method is difficult to be used in the clinical application of antibody drugs. In this study, IgG purification was carried out by using the pretreatment method to reduce the concentration of IgG, solid-phase purification, rapid enzyme digestion, shortening of digestion time, and clinical application of LC-MS/MS method. To achieve this goal, the quality analysis method is used to determine the identity and quality of the product. The separation conditions of the secondary and high speed liquid crystals are determined by the separation conditions. Pretreatment conditions, extraction conditions, enzyme digestion conditions and IgG purification conditions were determined. Solid phase extraction is possible due to the use of Oasis HLB. Mono Spin Trypsin is available within 20 minutes. MonoSpin ProG for serum IgG purification is available at low concentrations. The analysis method is suitable for determining the serum concentration of the patients. In this study, IgG purification was carried out in the presence of a solid phase and rapid digestion. This assay is clinically useful. A rapid and simple method for the determination of serum concentrations was developed for the determination of quantitative targets in this study. This assay is useful for the analysis of other antibodies.