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大腸癌患者における抗EGFR抗体薬効果予測を目的とした腫瘍内LDHB発現量の解析

结直肠癌患者瘤内LDHB表达水平预测抗EGFR抗体药效分析

基本信息

批准号：
18H00405
负责人：
長嶺歩
金额：
$ 0.34万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00405/
关键词：
乳酸脱水素酵素B 大腸がん抗EGFR抗体薬

项目摘要

KRAS遺伝子野生型大腸癌患者における抗EGFR抗体薬抵抗性の原因として、遺伝子解析の他にもタンパク質の質的・量的変化が重要と考えられる。申請者はこれまでにヒト大腸癌細胞株を用いたバイオマーカー探索研究において、細胞質内の乳酸脱水素酵素(LDH) Bの高発現が抗EGFR抗体薬の1つであるセツキシマブの先天的および後天的耐性化に関与している可能性を見出した。しかし、その臨床的意義は未だ不明である。本申請課題では、大腸癌患者由来の腫瘍組織を用いて、抗EGFR抗体薬の効果予測マーカーとしてのLDHBの臨床的有用性を後方視的に評価する。まず、腫瘍組織からのタンパク質抽出およびLDHB解析の条件検討を実施した。市販のタンパク質抽出キットを用いることで、腫瘍検体約10mgから解析に必要なタンパク質を十分量抽出することができた。抽出したタンパク質を還元アルキル化後、トリプシンにより断片化した。得られたサンプルを脱塩・濃縮カラムを用いて精製・濃縮し、LDHBに特異的なアミノ酸配列(SADTLWDIQK)をLC-MS/MSを用いて分析し、LDHB発現量を解析した。複数の腫瘍組織を解析した結果、細胞内LDHB発現量は腫瘍により大きく異なることを確認した。現在は、大腸癌患者の腫瘍組織解析のための準備を進めている。今後、セツキシマブの奏効率、無増悪生存期間および全生存期間と腫瘍組織中LDHB発現量との相関性を検討することで、LDHB測定の臨床的有用性を評価する予定である。

The causes of anti-EGFR antibody resistance in KRAS genetic wild-type colorectal cancer patients and the importance of qualitative and quantitative changes in the genetic analysis of genetic factors. The applicant's colon cancer cell line was used to explore the lactate dehydratase (LDH) in the cytoplasm of the colon cancer cell line. Bの高発appears that the anti-EGFR antibody 薬の1つであるセツキシマブのinnate and acquired resistance is related to the possibility of seeing it. The clinical significance of しかし and その is unknown. The subject of this application is the evaluation of the use of tumor tissue derived from colorectal cancer patients and the prediction of the effect of anti-EGFR antibody treatment on the clinical usefulness of LDHB in rear view.まず, tumor tissue からのタンパク quality extraction およびLDHB analysis conditions 検椒実时した. Commercially available のタンパククキットを Use いることで, tumor body about 10mg から analysis is necessary なタンパク性を 10% of the することができた. After extracting the したタンパクを and returning it to the original アルキル, the トリプシンにより fragmented した. Get the unique acid formula of られたサンプルを氩・concentrated カラムをいて refined・concentrated し, LDHB Column (SADTLWDIQK) was used for LC-MS/MS analysis and LDHB analysis. The results of the analysis of multiple tumor tissues and the amount of intracellular LDHB found in the tumor were analyzed and confirmed. Currently, we are preparing for the analysis of tumor tissue in patients with colorectal cancer. From now on, the efficacy rate of セツキシマブの, the non-increasing survival period, the overall survival period, and the LDHB disease in tumor tissue The current correlation and clinical usefulness of LDHB measurement have been evaluated and determined.