GGCX活性評価とプロテオーム解析を用いた新規ワルファリン効果規定因子の探索

使用 GGCX 活性评估和蛋白质组分析寻找新的华法林效应决定因素

• 批准号: 22K15324
• 负责人: 長嶺 歩
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Takasaki University of Health and Welfare
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15324/
• 关键词: ワルファリン; GGCX; ビタミンK; 凝固活性; プロテオミクス

ワルファリン（WF）の薬効予測のために多くの研究が実施されてきたが、効果規定因子の約40%は不明のままである。過去の研究ではPT-INRを用いて効果規定因子を探索しているため、未解明の個人差の要因がビタミンK（VK）サイクルから血液凝固のどの過程にあるのかが不明である。WFはγ-グルタミルカルボキシラーゼ（GGCX）の活性低下を介して薬効を示すため、本研究ではVKサイクル内の各因子によりGGCX活性を規定できるか、およびGGCX活性により凝固活性を規定できるかを分けて評価することで未解明の効果規定因子がどの過程にあるかを明らかにする。さらに個人差の過程に関連するタンパク質のプロテオミクスにより新規WF効果規定因子の検出を試みる。当該年度では「VKサイクル内の各因子によりGGCX活性を規定できるか」についての以下を実施した。1）VKサイクル内の因子とGGCX活性との相関の検討既知WF効果規定因子であるCYP2C9、CYP2C19、CYP4F2、VKORC1、GGCXの遺伝子変異をTaqman-Probe法を用いて解析した。また、ビタミンK（phylloquinone、menaquinone-4）およびWFの前処理方法の検討を実施し、高速液体クロマトグラフ―質量分析（LC-MS）法およびLC-UV法による測定系を確立した。さらに、GGCX活性を評価するため、VK依存性タンパク質（VKDP）の血液凝固因子のうち、半減期が長く血中濃度の高いプロトロンビンの特異的なペプチド配列6種を合成し、LC-MS法による測定系を確立した。2）GGCX活性とVK依存性タンパク質（VKDP）の凝固因子活性の相関の検討VKDPの血液凝固因子（第Ⅱ、第Ⅶ、第Ⅸ及び第Ⅹ因子）の凝固活性をシスメックス社の全自動血液凝固測定装置CA-600を用いて測定した。

The results of the study on WF prediction are estimated at about 40% of the time. Previous studies have explored factors that define PT-INR use, and have not yet clarified the main causes of individual differences in the process of blood coagulation. This study was conducted to investigate the factors that regulate GGCX activity in VK cells, and to evaluate the factors that regulate coagulation activity in VK cells. The individual difference process is related to the quality of the test results and the new WF effect of the test results. In this year, the following factors were implemented: "GGCX activity is regulated by various factors in VK service". 1) The correlation between VK and GGCX activity was analyzed by Taqman-Probe method, which was used to analyze the differences between CYP2C9, CYP2C19, CYP4F2, VKORC1 and GGCX. The determination system of high speed liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) and LC-UV was established. In addition, GGCX activity evaluation, VK-dependent protein (VKDP) and blood coagulation factors, half-life, long blood concentration and high plasma concentration of specific list of six kinds of synthesis, LC-MS method determination system was established. 2) Correlation between GGCX activity and VK-dependent coagulation factor activity (VKDP) The coagulation activity of VKDP (II, VII, IX and X factors) was measured by CA-600.