GGCX活性評価とプロテオーム解析を用いた新規ワルファリン効果規定因子の探索

使用 GGCX 活性评估和蛋白质组分析寻找新的华法林效应决定因素

• 批准号: 22K15324
• 负责人: 長嶺 歩
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Takasaki University of Health and Welfare
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15324/
• 关键词: ワルファリン; GGCX; ビタミンK; 凝固活性; プロテオミクス

ワルファリン（WF）の薬効予測のために多くの研究が実施されてきたが、効果規定因子の約40%は不明のままである。過去の研究ではPT-INRを用いて効果規定因子を探索しているため、未解明の個人差の要因がビタミンK（VK）サイクルから血液凝固のどの過程にあるのかが不明である。WFはγ-グルタミルカルボキシラーゼ（GGCX）の活性低下を介して薬効を示すため、本研究ではVKサイクル内の各因子によりGGCX活性を規定できるか、およびGGCX活性により凝固活性を規定できるかを分けて評価することで未解明の効果規定因子がどの過程にあるかを明らかにする。さらに個人差の過程に関連するタンパク質のプロテオミクスにより新規WF効果規定因子の検出を試みる。当該年度では「VKサイクル内の各因子によりGGCX活性を規定できるか」についての以下を実施した。1）VKサイクル内の因子とGGCX活性との相関の検討既知WF効果規定因子であるCYP2C9、CYP2C19、CYP4F2、VKORC1、GGCXの遺伝子変異をTaqman-Probe法を用いて解析した。また、ビタミンK（phylloquinone、menaquinone-4）およびWFの前処理方法の検討を実施し、高速液体クロマトグラフ―質量分析（LC-MS）法およびLC-UV法による測定系を確立した。さらに、GGCX活性を評価するため、VK依存性タンパク質（VKDP）の血液凝固因子のうち、半減期が長く血中濃度の高いプロトロンビンの特異的なペプチド配列6種を合成し、LC-MS法による測定系を確立した。2）GGCX活性とVK依存性タンパク質（VKDP）の凝固因子活性の相関の検討VKDPの血液凝固因子（第Ⅱ、第Ⅶ、第Ⅸ及び第Ⅹ因子）の凝固活性をシスメックス社の全自動血液凝固測定装置CA-600を用いて測定した。

This is due to the fact that the standard factor (WF) is about 40% higher than that of the control group. In the past, PT-INR has used the results to determine whether there are any personal differences due to the fact that the process of blood coagulation is not known because of the difference between K (VK). The low activity of WF gamma-ray specific antigen (GGCX) has been reported in this study. In this study, the GGCX activity of various factors in the VK was determined. The coagulation activity of each factor was determined. The coagulation activity of each factor was determined in this study, and the coagulation activity was determined. The process of personal error monitoring is due to the number of individual errors. This is due to the failure of the new rule WF. In the current year, the GGCX activity of all factors is determined to improve the performance of the following. 1) the internal factors of VK, the activity of GGCX, the activity of WF, the specification factors of WF, CYP2C9, CYP2C19, CYP4F2, VKORC1, GGCX were analyzed by Taqman-Probe method. The pre-processing method of phylloquinone, menaquinone-4, K (phylloquinone, menaquinone-4), high-speed liquid, high-speed liquid, and LC-UV method is used to determine the accuracy of the measurement system. The blood clotting factor was determined by GGCX-dependent enzyme assay (VKDP), the blood coagulation factor was detected by VK-dependent enzyme assay (VKDP), the blood coagulation factor was determined by LC-MS assay, and the blood clotting factor was determined by LC-MS method. 2) GGCX activity, VK dependent coagulation factor (VKDP), coagulation factor activity, blood coagulation factor (factors II, VII, IX, and Ⅹ), coagulation activity, coagulation activity, coagulation activity,