鼻性髄液漏の高感度かつ非侵襲的な診断方法の開発

开发一种高灵敏、无创的鼻脑脊液漏诊断方法

• 批准号: 18H00489
• 负责人: 星 京香
• 金额: $ 0.34万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00489/
• 关键词: 鼻性髄液漏; 脳脊髄液; ELISA

【目的】「鼻性髄液漏」は、鼻腔上部の極めて薄い骨板が損傷を受けることで、クモ膜下腔に存在する(脳脊)髄液が鼻腔内に漏出して起こる。頭部外傷や手術外傷により髄液漏が見逃されると30～40%の割合で遅発性髄膜炎を発症する。従来の診断法は、髄液中のグルコース濃度が高いことを利用したテステープによる鼻汁のグルコース測定である。しかし、テステープは鼻汁に対する髄液の混入率が20～30%以上でないと診断できない。我々は、髄液の混入率が1%程度でも髄液漏が診断可能である新規マーカーとしてProtein X(ProX)を見出した。本研究では、ProXを利用した鼻性髄液漏の新規診断方法の開発を目指す。【方法】髄液漏れが疑われる患者鼻汁を採取し、ウェスタンブロット法(WB法)でProXを定量する。WB法は操作が煩雑なため、より迅速で多数検体を測定可能なELISA法の構築を行う。構築したELISA法は性能試験(添加回収・同時再現・日差再現)で評価し、WB法の定量値と比較するため相関分析を行う。【研究成果】髄液漏れが疑われる18症例の鼻汁を検体として、WB法でProXを定量した。18症例中4症例で1ng-273ngのProXが検出された。次にProX-ELISA法を構築し、性能試験を行った。添加回収率は88%-109%、同時再現性試験のCVは9.4%、日差再現性試験のCVは8.4%と算出された。WB法とELISA法の定量値の相関係数はr=0.97(n=14)を示し、両方法において強い正の相関が見られた。定量下限値はWB法の時は0.5ng、ELISA法の時は0.05ngであった。ELISA法の高感度測定により、鼻汁中に含まれる微量なProXの定量が可能となり、鼻性髄液漏の検査においてELISA法は有効であることが示唆された。

[Objective] Nasal fluid leakage is caused by damage to the bone plate in the upper part of the nasal cavity and by leakage of nasal fluid in the lower part of the nasal cavity. 30 - 40% of patients with head injuries and surgical trauma have fluid leakage. The diagnostic method is to determine the concentration of the drug in the serum by using the drug. The mixing rate of nasal fluid is more than 20~30%. The rate of fluid contamination was reduced to 1% and the diagnostic possibility of fluid leakage was improved. This study is aimed at developing a new diagnostic method for nasal leakage using ProX. [Methods] Nasal juice was collected from patients with suspected nasal leakage, and ProX was quantified by WB method. WB method is easy to operate and rapid to detect most of the samples. ELISA method is constructed. To construct ELISA method and performance test (add loop, simultaneous reproduction, daily difference reproduction), evaluation, WB method and quantitative comparison, correlation analysis [Results] 18 cases of nasal fluid leakage were suspected to be detected by WB method. ProX ranging from 1ng to 273ng was detected in 4 of the 18 cases. ProX-ELISA assay construction, performance test The additive recovery rate was 88%-109%, the CV of simultaneous reproducibility test was 9.4%, and the CV of daily reproducibility test was 8.4%. The correlation coefficient of WB method and ELISA method was r=0.97(n=14). The lower limit of quantification was 0.5ng for WB and 0.05ng for ELISA. ELISA method for the detection of high sensitivity, nasal juice contains trace amounts of ProX may be detected, nasal fluid leakage detection ELISA method has no effect.