動物の異物認識とタンパク質濃度変化について

本研究ではアフリカツメガエルの大腸菌に対する異物認識とタンパク質の濃度変化を調べることを目的とした。さらに、本研究を通して大半の高校生がタンパク質を栄養素の一種としか捉えていない現状を変え、生理活性を持ったタンパク質が多く存在することを知ることを通して、タンパク質の重要性を知ってもらうことも大きな目的である。大腸菌注射により血中タンパク質の濃度の経時的変化をSDS PAGEの各バンドの濃さを測定ことによって調べた。次に、抗菌タンパク質の単離をするために精製法の確立を試みた。高等学校において、FPLCやHPLC等の液体クロマトグラフィーのような高額な設備はないので、電気泳動の原理を活用した精製法の開発を試みた。まず、材料として卵白を用いて、LB寒天培地中で培養した枯草菌に対する抗菌活性を指標に、NATIVE PAGE後のゲルから自作の抽出装置を用いて抗菌タンパク質を抽出し精製を進めた。結果として抗菌タンパク質リゾチームの精製に成功した。さらに、この方法を用いて、大腸菌皮下注射後のアフリカツメガエル血中から抗菌タンパク質の精製を試みた。3種のタンパク質の血中濃度が大腸菌注射によって、注射3日目をピークに増加することが明らかになった。これらのタンパク質はSDS電気泳動の結果から、分子量は大きいものから約160kDa、67kDa、2.5kDaであることが明らかになった。そして、それらを大腸菌に対する抗菌活性を指標に本研究で開発したタンパク質抽出装置を用いて精製を試みたところ、不純物が混じり完全ではないがほぼ精製することができた。しかしながら、まだ純度は低いので分子量が近いものの除去をさらに行い精製度を高める研究を行っていきたい。また、これら3種のタンパク質は、共に注射3日目という早い時期にピークをむかえているので、抗体タンパク質がピークをむかえるのに通常早くとも15日は必要とされる抗原抗体反応には関与せず、自然免疫に関与していることが考えられる。

本研究ではアフリカツメガエルの大腸菌に対する異物認識とタンパク質の濃度変化を調べることを目的とした。さらに、本研究を通して大半の高校生がタンパク質を栄養素の一種としか捉えていない現状を変え、生理活性を持ったタンパク質が多く存在することを知ることを通して、タンパク質の重要性を知ってもらうことも大きな目的である。大腸菌注射により血中タンパク質の濃度の経時的変化をSDS PAGEの各バンドの濃さを測定ことによって調べた。次に、抗菌タンパク質の単離をするために精製法の確立を試みた。高等学校において、FPLCやHPLC等の液体クロマトグラフィーのような高額な設備はないので、電気泳動の原理を活用した精製法の開発を試みた。まず、材料として卵白を用いて、LB寒天培地中で培養した枯草菌に対する抗菌活性を指標に、NATIVE PAGE後のゲルから自作の抽出装置を用いて抗菌タンパク質を抽出し精製を進めた。結果として抗菌タンパク質リゾチームの精製に成功した。さらに、この方法を用いて、大腸菌皮下注射後のアフリカツメガエル血中から抗菌タンパク質の精製を試みた。3種のタンパク質の血中濃度が大腸菌注射によって、注射3日目をピークに増加することが明らかになった。これらのタンパク質はSDS電気泳動の結果から、分子量は大きいものから約160kDa、67kDa、2.5kDaであることが明らかになった。そして、それらを大腸菌に対する抗菌活性を指標に本研究で開発したタンパク質抽出装置を用いて精製を試みたところ、不純物が混じり完全ではないがほぼ精製することができた。しかしながら、まだ純度は低いので分子量が近いものの除去をさらに行い精製度を高める研究を行っていきたい。また、これら3種のタンパク質は、共に注射3日目という早い時期にピークをむかえているので、抗体タンパク質がピークをむかえるのに通常早くとも15日は必要とされる抗原抗体反応には関与せず、自然免疫に関与していることが考えられる。