特にウシ・ヒト間,人獣共通真菌症起因菌の分子疫学的研究

人畜共患真菌病原体，特别是牛和人类之间的分子流行病学研究

• 批准号: 19924010
• 负责人: 滝澤 香代子
• 金额: $ 0.4万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19924010/
• 关键词: 人獣共通真菌症; Trichophyton verrucosum; 分子疫学

人獣共通感染症の1つで、特にウシへの易感染性が特徴であるTrichophyton verrucosumに焦点を当て,分子疫学的研究を行う事を目的とした。動物の真菌症もヒト同様に,症例数の増加並びに原因菌種の多様化が見られる。目的達成の為に重要な菌株収集は、ウシの入手経路、放牧中及び牛舎の環境、酪農家への感染等の観点から行い、日本株は仔牛から成牛までの動物株を中心に、国外株は申請者所属の菌株保存施設に保存されている中国、オランダ、米国等5カ国からの分離株を用い、合計41株で本課題に取組んだ。本菌種は生育に1カ月をも要し,形態的特徴を欠く糸状菌であるが故に株識別のための分子生物学的方法の確立が必須であるが、本研究における最重要課題はその前駆段階としての核酸の抽出であった。5,6種の抽出法を試みたが、phenol-chroloform法で最も安定的に多めの核酸が得られた。その濃度、純度にも関わらず、専用primer setsで行ったrDNAのITS,D1D2の塩基配列解析成功率は、其々85%(35株)、44%(18株)であった。それら結果からITS塩基配列には、3タイプに分類される特徴的なITS1領域が存在した。主グループに属した25のウシ分離株については、1bpの塩基置換を持つ2株以外の全てで同一の配列を示した。またD1D2は、ヒト分離株2株の塩基数及び置換が大きく異なる他、他の16株は全て同一の配列を示した。未だ研究がなされておらず、株識別に最も有効と考えたNTS領域については増幅が極めて困難で、成功率は1割に満たず、更に複数バンドの出現等今後の課題となった。最終目的のrDNAとRAPD-PCR法による疫学的比較の為に行った、4種のprimerA,B,C,Dを用いたRAPDの結果から、3種が有用であった。Primer-A、Bでは其マ7,3タイプに識別され、primer-Cでは全菌株で同一バンドパターンが示された。本課題のキーポイントとなった核酸抽出とrDNA増幅を考慮した時、従来手法であるRAPDは本菌の分子疫学的研究には極めて有用であり、primer-CによるRAPDは、特に本菌の簡便な分子的同定法の確立に期待が待たれた。

Common infectious diseases in humans, special susceptibility to infection, trichophyton verrucosum, focus, and purpose of molecular epidemiology research. Fungal diseases in animals are common, and the number of cases is increasing and the cause of the disease is the multiplication of bacterial species. The purpose of achieving the goal is to collect important bacterial strains, start the road, the environment where cattle are grazing, and the infection of dairy farmers, etc. The strain preservation facilities of the center and the applicant of foreign isolates have preserved 5 strains of isolates from China, Japan, and the United States, and a total of 41 strains were selected for this project. The characteristics of this strain are the growth of the strain, the morphological characteristics of the strain, and the identification of the strain by molecular biology. It is necessary to establish the method, and the most important issue of this study is to extract the nucleic acid at the first stage. 5,6 types of extraction methods are available, and the phenol-chroloform method is the most stable nucleic acid extraction method. The success rate of concentration and purity of rDNA based primer sets and D1D2 base alignment analysis was 85% (35 strains) and 44% (18 strains) respectively. The results of the それら result からITS base arrangement には, the 3タイプに classification される特徴's なITS1 field がexistence. The main グループに genus した25のウシisolate strain については and the 1bp base-substituted strain except for the 2 strains are all the same and the same arrangement is shown. The base number of the 2 isolates of またD1D2 and ヒト and the substitution of が大きくdifferentなるhim, 16 strains of のはall are the same and the same arrangement is shown. Unresearched, strain identification is the most effective, and the NTS field has been expanded. The extremely difficult problem, the success rate of 1 cut, and the emergence of complex numbers are all future issues. The final purpose is to compare the rDNA and RAPD-PCR method and the epidemiology of the results, and the results of RAPD using 4 kinds of primers A, B, C, and D, and the usefulness of 3 kinds. Primer-A and B are the same as the whole strain of Primer-A and Primer-C. In this project, when nucleic acid extraction and rDNA amplification are used, the RAPD method and the molecular epidemiology of this bacterium are studied. We are looking forward to the establishment of the identification method of simple and easy molecular identification of には极めて useful であり, primer-C によるRAPDは, and special bacteria.