特にウシ・ヒト間,人獣共通真菌症起因菌の分子疫学的研究

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人獣共通感染症の1つで、特にウシへの易感染性が特徴であるTrichophyton verrucosumに焦点を当て,分子疫学的研究を行う事を目的とした。動物の真菌症もヒト同様に,症例数の増加並びに原因菌種の多様化が見られる。目的達成の為に重要な菌株収集は、ウシの入手経路、放牧中及び牛舎の環境、酪農家への感染等の観点から行い、日本株は仔牛から成牛までの動物株を中心に、国外株は申請者所属の菌株保存施設に保存されている中国、オランダ、米国等5カ国からの分離株を用い、合計41株で本課題に取組んだ。本菌種は生育に1カ月をも要し,形態的特徴を欠く糸状菌であるが故に株識別のための分子生物学的方法の確立が必須であるが、本研究における最重要課題はその前駆段階としての核酸の抽出であった。5,6種の抽出法を試みたが、phenol-chroloform法で最も安定的に多めの核酸が得られた。その濃度、純度にも関わらず、専用primer setsで行ったrDNAのITS,D1D2の塩基配列解析成功率は、其々85%(35株)、44%(18株)であった。それら結果からITS塩基配列には、3タイプに分類される特徴的なITS1領域が存在した。主グループに属した25のウシ分離株については、1bpの塩基置換を持つ2株以外の全てで同一の配列を示した。またD1D2は、ヒト分離株2株の塩基数及び置換が大きく異なる他、他の16株は全て同一の配列を示した。未だ研究がなされておらず、株識別に最も有効と考えたNTS領域については増幅が極めて困難で、成功率は1割に満たず、更に複数バンドの出現等今後の課題となった。最終目的のrDNAとRAPD-PCR法による疫学的比較の為に行った、4種のprimerA,B,C,Dを用いたRAPDの結果から、3種が有用であった。Primer-A、Bでは其マ7,3タイプに識別され、primer-Cでは全菌株で同一バンドパターンが示された。本課題のキーポイントとなった核酸抽出とrDNA増幅を考慮した時、従来手法であるRAPDは本菌の分子疫学的研究には極めて有用であり、primer-CによるRAPDは、特に本菌の簡便な分子的同定法の確立に期待が待たれた。