脂肪酸酸化調節因子マロニルCoA量の測定法の開発

脂肪酸氧化调节剂丙二酰辅酶A含量测定方法的开发

• 批准号: 20929012
• 负责人: 斉藤 久美子
• 金额: $ 0.37万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20929012/
• 关键词: マロニルCoA; 脂質代謝; non-RI測定

肥満・糖尿病の原因として糖・脂質代謝異常があげられる。現在、各臓器の代謝変化をin vivoで解析するには、放射性化合物(RI)を用いた方法で行い、特別な実験施設を必要とする。そこで、非放射性(non-RI)試薬による糖・脂質代謝測定法の開発を行っている。本研究では、脂肪酸酸化調節因子として働くマロニルCoA量の測定法の開発を行った。non-RIマロニルCoAの測定は、酵素分解による反応生成物を測定した。まず、脂肪酸合成酵素(FAS)によりアセチルCoAと反応させ、生成したNADPをD-Glucose-6-phosphate (G6P)とGlucose dehydorogenase (G6PDH)で反応させ、6-Phospho-D-Gluconate (6-PG)に変える。さらに6-PGをPhosphoglconate dehydorogenase (6-PGDH)で反応し、NADPHに変換、これを酵素サイクリングにより増幅後、比色定量した。酵素濃度、反応時間等の至適反応条件を検討し、96ウェルプレートでマロニルCoA標準液による標準直線(0～80pmol)を作成した。次に生体試料の調整方法を検討した。生体試料(脳神経核、筋肉、肝臓)は、測定緩衝液でホモジナイズ後、熱処理、遠心した。上清中のマロニルCoA量を測定し、non-RIでの組織中マロニルCoAの測定を可能にした。しかし、筋肉や肝臓においては、試料中に含まれる多量の内因性物質(G6P、6-PG等)の充分な除去が難しく、マロニルCoAのみを選択的に測定することが難しい。引き続き、内因性物質を確実に除去するため、方法め改良を行っている。今後は、絶食や過栄養食を与えたときめ脳視床下部神経核、末梢組織の微量なマロニルCoAの変化量を測定し、動物を用いた治療薬の開発、スクリーニングに活用していきたい。

Causes of obesity and diabetes mellitus At present, the metabolism of various organs in vivo analysis, radioactive compounds (RI) in the use of methods, in particular, the implementation of necessary The development of glucose and lipid metabolism assays for non-radioactive (non-RI) assays is under way. In this study, we developed a method for determining the amount of fatty acid regulatory factors. Non-RI CoA determination, enzyme decomposition, reaction product determination Fatty acid synthase (FAS) is a enzyme that produces NADP, D-Glucose-6-phosphate (G6P), Glucose dehydrogenase (G6PDH), 6-Phospho-D-Gluconate (6-PG). 6-PG, Phosphoglconate dehydrogenase (6-PGDH), NADPH, and enzyme activity were measured by colorimetry. A standard straight line (0~80pmol) was prepared for enzyme concentration, reaction time, etc. under optimal reaction conditions. Second, the adjustment method of biological samples was discussed. Biological samples (nucleus, muscle, liver), assay buffer, heat treatment, and centrifugation Determination of CoA in supernatant and non-RI tissues It is difficult to determine the content of endogenous substances (G6P, 6-PG, etc.) contained in the sample. The method of removing endogenous substances In the future, the amount of CoA in the lower part of the brain and peripheral tissues will be measured, and the development and use of CoA in animal therapy will be carried out.

项目成果

非放射性(non-RI)試薬による糖・脂質代謝測定法の開発

开发使用非放射性（non-RI）试剂的糖和脂质代谢测量方法

• 发表时间: 2009
• 作者: 長田誠;井上克枝;他;斉藤久美子
• 通讯作者: 斉藤久美子