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細胞内脂肪酸代謝産物アシルCoAの測定法の開発

细胞内脂肪酸代谢物酰基辅酶A测定方法的开发

基本信息

批准号：
21930019
负责人：
斉藤久美子
金额：
$ 0.38万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21930019/
关键词：
アシルCoA 脂肪酸代謝 non-RI測定

项目摘要

肥満・糖尿病の原因として糖・脂質代謝異常があげられる。肥満・糖尿病の発症過程において各臓器の糖・脂質代謝変化を測定することは、肥満・糖尿病の発症メカニズム、治療法の開発に重要である。現在、各臓器の代謝変化をin vivoで解析するには、放射性化合物を用いた方法で行い、特別な実験施設を必要とする。そこで、この問題に対処するため、非放射性試薬(non-RI)による糖・脂質代謝測定法の開発を行っている。最近の研究で、脂肪酸合成系の一分子であるアシルCoAが摂食や代謝調節に関わるという報告があり、本研究では、この摂食の鍵分子であるアシルCoAのnon-RIによる微量測定法の開発を行った。測定は、酵素反応を利用し、酵素反応による反応産物を測定した。試料中のアシルCoAをアシルCoAオキシダーゼで酸化し、過酸化水素(H_2O_2)を生成する。そのH_2O_2をペルオキシダーゼと作用させ、比色にて定量した。さらにこの測定系で、アシルCoAシンセターゼを用いることにより脂肪酸量を測定でき、測定した脂肪酸量から内因性のアシルCoA量を差し引くことで試料中の脂肪酸量を算出することにした。最初に酵素反応系の至適条件の検討を行い、脂肪酸、アシルCoA(Palmitoyl-CoA)の標準直線を作成した。次に組織からの脂肪酸、アシルCoAの抽出方法及び測定条件の検討を行った。組織蛋白量約1mgの試料より、non-RIでアシルCoA量の測定を可能にした。しかし、測定に高濃度(約1mg蛋白)の組織量を要するため、バックグラウンドが上昇する傾向にある。そこで現在、バックグラウンドを下げるため、内因性物質由来の酵素反応を除く方法を検討し、より少ない組織量での測定を可能にするため、さらなる改良を行っている。

Causes of obesity and diabetes mellitus The determination of carbohydrate and lipid metabolism in various organs during the development of diabetes mellitus is important for the development of diabetes mellitus and its treatment. Now, the metabolism of various organs in vivo analysis, radioactive compounds in the use of methods, in particular, the implementation of necessary The development of sugar and lipid metabolism assays for non-radioactive reagents (non-RI) is under way. Recent studies on fatty acid synthesis as a molecule involved in the regulation of food and metabolism report the development of microassays for fatty acid synthesis as a molecule involved in the regulation of food and metabolism. Determination of enzyme activity A sample contains a mixture of CoA and H_2O_2. H_2O_2 is the most important component of the organic solvent. The determination of fatty acid content is based on the determination of fatty acid content and the determination of fatty acid content. A standard straight line was constructed for the initial study of enzyme reaction systems under optimal conditions, fatty acids, and allo-CoA (Palmitoyl-CoA). The extraction method and determination conditions of fatty acids and CoA in secondary tissues were discussed. The amount of tissue protein is about 1mg, and the determination of non-RI is possible. There is a tendency to increase tissue mass at high concentrations (about 1mg protein). Now, we are ready to make improvements, discuss methods to eliminate enzymatic reactions from endogenous substances, and make it possible to measure even a small amount of tissue.