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HPLCによる視床下部のアシルCoAの個別定量

通过 HPLC 对下丘脑酰基辅酶 A 进行个体定量

基本信息

批准号：
22930019
负责人：
斉藤久美子
金额：
$ 0.36万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22930019/
关键词：
パルミトイル-CoA イオン交換カラム

项目摘要

肥満・糖尿病の原因として糖・脂質代謝異常があげられる。そこで、我々は、肥満・糖尿病を研究する上で、基本的な実験である糖・脂質代謝の測定方法の開発を行っている。今までにnon-RI2-デオキシグルコースを用いるグルコース利用速度測定法の開発(Anal.Biochem.2011)や、脂肪酸代謝測定方法の開発を行なった。本年は、組織中のアシルCoAを個別に定量する測定法の開発を行なった。その中で特にパルミトイル-CoA(飽和脂肪酸)の個別定量を検討した。カラムは、2-(2-pyridyl)ethyl-functionalized silica gelによるイオン交換カラムを用い、添加溶剤のpH変化により抽出した。方法は、マウス肝臓を脂溶性溶剤(pH6)でホモジナイズし、ホモジナイズ溶液をカラムに添加、未吸着分を洗浄(pH3-4)後、溶出液(pH6-7)で溶出した。はじめにマウス肝臓からのパルミトイル-CoA抽出、定量条件を検討した。パルミトイル-CoAのカラム吸着率を調べた。既知量のRI標識パルミトイル-CoAをカラムに添加し、抽出されたRI量を測定した。添加量の70-90%が、カラムに吸着でき、溶出できた。この時カラム未吸着分は、再度カラムに添加したが吸着されなかったことから、添加溶液中のほとんどのパルミトイル-CoAがゲルに吸着したと考える。次に既知量のRI標識パルミトイル-CoAを肝臓ホモジナイズ溶液に加え、測定した。同様の結果が得られた。しかし、溶出において1回の溶出で吸着量の30%くらいしか溶出できず、完全に回収するには3回以上の溶出操作を行なっている。現在、溶出条件の検討と溶出液の酵素法による定量を検討している。そして絶食や過栄養食を与えたマウス肝臓や脳のパルミトイルCoAの変化量測定に利用したい。

Causes of obesity and diabetes mellitus Development of a method for measuring sugar and lipid metabolism in the study of diabetes mellitus Development of a method for measuring fatty acid metabolism using a velocity measurement method (Anal. Biochem. 2011). This year, the development of individual quantitative assays for CoA in tissues The individual quantitative analysis of saturated fatty acids (CoA) is discussed. 2-(2-pyridyl)ethyl-functionalized silica gel can be used as a solvent for pH change. Method: Add the fat-soluble solvent (pH6) to the solution, wash it (pH3-4) without adsorption, and dissolve it (pH6-7). The conditions for extraction and quantification of CoA were discussed. The absorption rate of CoA was adjusted. The RI identifier of the known quantity is determined by adding and extracting the RI identifier. Add 70-90%. This is the first time that the solution has been added to the solution. The next known quantity of RI is determined by addition of a solution containing the following ingredients: The same results are obtained. 30% of the adsorption amount in the first cycle of dissolution, 30% of the adsorption amount in the second cycle of dissolution, 30% of the adsorption amount in the third cycle of dissolution, 30% of the adsorption amount in the fourth cycle of dissolution, and 30% of the adsorption amount in the fourth cycle of dissolution. Now, the dissolution conditions and dissolution of enzyme method for quantitative analysis. The amount of food and water consumed by the food is determined by the amount of food consumed by the food.