造血幹細胞移植後ウイルス感染症の早期診断・治療評価システムの構築

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【研究目的】造血幹細胞移植(SCT)後のウイルス感染症は、移植患者が高度の免疫抑制状態にあるためウイルスに対する特異免疫が誘導されず、重症化することが多い。SCT後の出血性膀胱炎を引き起こすウイルスはヘルペスウイルス、アデノウイルス(ADV)、ポリオーマウイルスなどがあるが、鋭敏なウイルス検出法が確立されていないため診断に苦慮することある。本研究ではreal-time PCR法によるヒトポリオーマウイルスに属するBK virus(BKV)およびJC virus(JCV)DNA量の測定系の開発をし、提出された尿検体を用いてその有用性を確認する。【研究方法】同種造血幹細胞移植患者の尿を対象とした。サンプルDNAは尿よりQIAamp DNA Blood Mini Kitを用いて抽出した。real-time PCRはABI PRISM 7900HTを用いて行い、TaqManケミストリによる絶対定量法によりコピー数を算出した。ターゲット遺伝子はBKVおよびJCVのVP1領域に設定した。標準サンプルとして、BKVおよびJCVのプラスミドクローンを使用し、10から1x10^8 copies/assayの10倍希釈系列を調整して用いた。【研究成果】real-time PCRにおいて標準曲線は8Logの範囲で広いダイナミックレンジを有しており、増幅効率は良好であった。本測定系はADVや他のヘルペスウイルスと交差反応は認められなかった。BKVおよびJCVによる出血性膀胱炎患者において、尿中BKVおよびJCV量は免疫抑制剤および抗ウイルス剤の影響により変動がみられた。また、尿中AdVと再活性化によるDNA量の変動に相関が認められなかったが、さらに臨床的意義を検討していく必要がある。本研究は造血幹細胞移植後ウイルス感染症の早期診断および治療効果判定に有益な情報をもたらすものと示唆された。