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サルES細胞由来肝細胞のセルソーターによる分離と再培養系の確立及び薬物動態試験

使用细胞分选仪分离猴ES细胞来源的肝细胞、建立再培养系统和药代动力学研究

基本信息

批准号：
22926013
负责人：
丸山順也
金额：
$ 0.36万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22926013/
关键词：
ES細胞肝細胞薬物代謝酵素

项目摘要

【目的】ヒト胚性肝細胞(ES細胞)は、あらゆる細胞に分化可能な万能細胞であり、肝細胞に分化させた場合再生医療の他に、薬物動態試験など創薬研究への応用も期待されている。しかし、ヒトES細胞は生命倫理上の問題があり、実際の利用は困難である。カニクイザル肝の薬物代謝酵素の性質はヒトと良く類似していることから、ヒトのモデルとして用いられている。本研究の目的は、カニクイザルES細胞の肝細胞への効率的な分化法を確立し、薬物動態試験に利用可能か薬物代謝酵素シトクロムP450(CYP)の活性とその誘導性について明らかにすることである。【方法】内胚様及び肝細胞への分化誘導因子としてアクチビンA、ジメチルスルホキシド、肝細胞増殖因子、オンコスタチンM、デキサメタゾン等を添加した。細胞培養には、細胞外マトリックスとしてマウス腫瘍細胞抽出成分であるBDマトリゲルを用い、培地は変法ランフォード培地を用いて培養を行った。【結果・考察】カニクイザルES細胞から肝細胞への分化は、ROCK阻害剤(Y-27632)存在下でフィーダーレス培養を行った後、アクチビンAで4日間処理することで内胚様に分化させた。次いで、マトリゲル上でジメチルスルホキシド、肝細胞増殖因子、オンコスタチンM、デキサメタゾンを添加した変法ランフォード培地にて培養を行うことで効率的に肝細胞に分化することが明らかとなった。また、カニクイザルES細胞由来肝細胞のCYP3A活性を、cmCYP3A4のmRNA発現量およびテストステロン6β-水酸化活性によって評価した。その結果、CYP3Aの誘導剤であるリファンピシンで、cmCYP3A4のmRNA発現量はコントロールの7.4倍、テストステロン6β-水酸化活性は4.3倍に上昇した。以上の結果から、本研究によって得られたカニクイザルES細胞由来肝細胞は、ヒト肝細胞と同様な性質を示すことが明らかとなり、薬物動態試験に利用可能であることが示唆された。

[objective] the differentiation of embryogenic liver cells (ES cells) and liver cells may be omnipotent cells, liver cells and regenerative medicine cells. In terms of life problems, problems and difficulties in the use of ES cells, there are many problems in life. The good properties of the liver are similar to those of the liver in the presence of enzymes. The purpose of this study is to determine the differentiation method of ES cell cycle rate, and to determine the activity of enzyme P450 (CYP) by the method of differentiation, and to determine the activity of P450 (P450). [methods] Endodermal and hepatic cell differentiation factors were added, such as endoderm cell differentiation factor, liver cell differentiation factor and so on. Cell culture, extracellular BD, cell culture, and so on. [results] the differentiation of ES cells, the differentiation of liver cells and the presence of ROCK blocker (YM27632) were investigated. After the operation, the differentiation of endoderm cells was analyzed within 4 days. In the first place, the cells of the liver were differentiated from the cells of the liver, the cells of the liver. The CYP3A activity and cmCYP3A4 mRNA activity of the liver cells were measured. The 6 β-water acidification activity was detected in the liver. The results showed that the results of CYP3A, cmCYP3A4, mRNA, and 6 β-water acidification activity were 7.4 and 4.3times higher than those of the control group. According to the results above, the results of this study show that the ES cells are derived from the liver cells, the liver cells are the same as the liver cells, and the results of the above results show that the liver cells are caused by the liver cells, the liver cells and the liver cells in this study.