ヒト胎児肝細胞のCYP3A発現における転写因子PGC1αおよびHNF4αの影響

研究目的ヒト胎児肝(HFL)細胞のCYP3A発現におよぼす転写因子HNF4α(hepatocyte nuclear factor 4α)およびPGC1α(peroxisome proliferator activated receptor γ coactivator 1α)の影響を明らかにすることを目的とする。研究方法LHFL細胞にHNF4αを過剰発現させるため、in vitrogenのGatewayクローニングシステムによりHNF4α発現アデノウイルスベクターの作成を試みた。研究成果1.HNF4αのTOPOベクター作成段階で、塩基配列に変異が確認された。再度クローニング実施するも、ライゲーションに失敗し、大腸菌を増幅させることができなかった。原因として、HNF4α全長を増幅させる段階で変異が生じている可能性が考えられた。現在はHNF4αのプライマーを再設計しHNF4αのTOPOベクター作成を試みている段階である。2.これまでに明らかにしてきたHNF4αおよびPGC1αの発現量の低下がPXR(pregnane X receptor)過剰発現HFL細胞におけるリファンピシンのCYP3A4誘導を阻害している可能性についてまとめ、Drug Metabolism and Pharmacokineticsに投稿し、受理された。今後の課題HNF4αには遺伝子多型が存在し、今回ベクターを作成しようとしているHNF4α2はHNF4α8と配列が類似しているが、活性が異なることが明らかにされている。今後の課題として、HNF4α2およびHNF4α8のベクターを作成し、それぞれのCYP3A発現におよぼす影響について比較検討する必要があると考えている。

研究目的ヒト胎児肝(HFL)細胞のCYP3A発現におよぼす転写因子HNF4α(hepatocyte nuclear factor 4α)およびPGC1α(peroxisome proliferator activated receptor γ coactivator 1α)の影響を明らかにすることを目的とする。研究方法LHFL細胞にHNF4αを過剰発現させるため、in vitrogenのGatewayクローニングシステムによりHNF4α発現アデノウイルスベクターの作成を試みた。研究成果1.HNF4αのTOPOベクター作成段階で、塩基配列に変異が確認された。再度クローニング実施するも、ライゲーションに失敗し、大腸菌を増幅させることができなかった。原因として、HNF4α全長を増幅させる段階で変異が生じている可能性が考えられた。現在はHNF4αのプライマーを再設計しHNF4αのTOPOベクター作成を試みている段階である。2.これまでに明らかにしてきたHNF4αおよびPGC1αの発現量の低下がPXR(pregnane X receptor)過剰発現HFL細胞におけるリファンピシンのCYP3A4誘導を阻害している可能性についてまとめ、Drug Metabolism and Pharmacokineticsに投稿し、受理された。今後の課題HNF4αには遺伝子多型が存在し、今回ベクターを作成しようとしているHNF4α2はHNF4α8と配列が類似しているが、活性が異なることが明らかにされている。今後の課題として、HNF4α2およびHNF4α8のベクターを作成し、それぞれのCYP3A発現におよぼす影響について比較検討する必要があると考えている。