肺癌神経内分泌分化の調節機構:翻訳語修飾プロテオミクス解析による試み

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研究目的:小細胞肺癌や大細胞神経内分泌癌は、神経内分泌分化した肺癌である。私は、神経内分泌分化を促進する転写因子hASH1(human achaete-scute homologue 1)を肺腺癌培養細胞株A549に遺伝子導入した細胞株を樹立した。このhASH1遺伝子導入A549細胞は、対照培養mock A549細胞に比較して接着性から浮遊性へと表現型を大きく変化させた。本研究は、このhASH1遺伝子導入細胞株を用いた核蛋白質の翻訳後修飾プロテオミクス解析及びhASH1結合蛋白質解析を行い、hASH1同様に肺癌細胞の神経内分泌分化に関わる機能蛋白質を明らかし、さらに新規肺癌マーカー(特に小細胞癌)の同定を目的して行われた。研究方法:試料には、hASH1遺伝子導入A549細胞と対照培養mock A549細胞を用意した。はじめに、これらの両細胞株を用いてこのhASH1遺伝子導入細胞株が、神経内分泌分化を示すことを確認するため神経内分泌分化マーカーであるchromograninA,synaptophysin,calcitonin-gene related peptideなどの発現をRT-PCR,Western blotting,免疫細胞化学染色法で確認した。今回、両細胞株の総蛋白抽出物及び核蛋白抽出物を用いてhASH1結合蛋白の同定を試みた。研究成果:総蛋白抽出物及び核蛋白抽出物をポリアクリルアミドゲルにて電気泳動し、銀染色で両細胞株間の蛋白バンドの差をみた。その結果、総蛋白抽出物でhASH1遺伝子導入により発現が亢進した蛋白バンドが3ヶ所、発現が抑制された蛋白バンドが15ヶ所検出された。核蛋白抽出物ではhASH1遺伝子導入により発現が亢進した蛋白バンドが11ヶ所、発現が抑制された蛋白バンドが5ヶ所、リン酸化と推定される電気泳動上の差異(バンドシフト)が1ヶ所検出された。