アセチルコリンエステラーゼ活性測定の自動分析法の確立

乙酰胆碱酯酶活性自动分析方法的建立

• 批准号: 23931037
• 负责人: 間瀬 浩安
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23931037/
• 关键词: アセチルコリンエステラーゼ自動測定; 汎用自動分析装置

アセチルコリンエステラーゼ(以下AChE)はアセチルコリンを介して神経伝達系をコントロールする酵素である。有機リン系農薬を服毒した場合には、このアセチルコリンエステラーゼおよび血清中に存在するブチルコリンエステラーゼが低下する。現在、有機リン中毒患者の臨床経過としては、ブチルコリンエステラーゼを観察することが一般に行われている。しかし有機リン中毒の場合は神経伝達系作動に関与するAChEを測定することが望ましいとされている。従来の測定法では、特異性も低く用手法で行うために時間も要し有機リン中毒患者経過観察としての利用頻度は低い。今回はAChEに特異的とされるMATP+を試薬として日立7600自動分析装置Pモジュール(日立ハイテクノロジーズ)を使用して測定法確立を試みた。1.自動分析装置への分析条件設定用手法の測定法に準じSample量12.5μL、使用試薬量は第一試薬225μL、第2試薬25μLとして分析条件を入力しエラーの発生しないことが確認できた。2.致適測定条件の検索測定する試薬の致適pHを7.0から8.0の間で検索した、最も反応性の良かったpHは7.4であった。致適測定波長を見つけるために、溶血させた血液をSampleとして自動分析装置で設定できる340～800nmの範囲で調査を行い、405nmでの吸光度が最も良いことが確認できた。3.自動分析装置への致適条件での測定測定波長405nm、第一試薬pH7.4リン酸バッファー、第2試薬DTNB、MATP+混和基質として再度測定条件を入力し、従来法との相関、同時再現性および日差再現性の確認を行った。同時再現性で多少のバラツキが見られるものの相関性、日差再現性は良好な結果が得られた。本測定条件により自動分析装置への対応が可能であることが示唆される。

The enzyme is a part of the nervous system. In the case of taking poison, the organic drug is present in the serum. Now, the clinical history of patients with organic poisoning has changed. In the case of organic poisoning, AChE is determined in relation to the operation of the nervous system. The method of determination is specific and the frequency of use is low. This time, the MATP+ test was established using the Hitachi 7600 automatic analyzer. 1. For the determination method of the automatic analyzer, the Sample amount is 12.5μL, the test amount is 225μL, and the second test amount is 25μL. 2. The optimum pH for the determination of the test conditions is 7.0 to 8.0, and the optimum pH for the determination is 7.4. The appropriate measurement wavelength is 340~800nm, and the absorbance at 405nm is the best. 3. The automatic analyzer is equipped with suitable conditions for measurement wavelength of 405nm, pH 7.4 for the first test, DTNB for the second test, MATP+ for the mixed matrix, and re-measurement conditions for the second test. The correlation and day-difference reproducibility of the simultaneous reproducibility and the day-difference reproducibility are good. It is possible to match the automatic analysis device with these measurement conditions.