Dicer-floxマウスを用いたiPS細胞におけるmicroRNAの役割の解析

使用 Dicer-flox 小鼠分析 microRNA 在 iPS 细胞中的作用

• 批准号: 24930005
• 负责人: 飯田 有津美
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24930005/
• 关键词: miRNA; iPS; Dicer

内容:Dicerを欠損可能なiPS細胞の樹立のために、Dicer-floxマウスの尻尾の線維芽細胞を培養し、そこにOxt3/4,Sox2,Klf4,c-mycをレトロウイルスにて発現させ、iPS株を樹立した。一方、Dicer-floxがホモでRosaCreERT2をヘテロでもつマウスを準備し、ここからも同様の方法でiPS細胞を樹立した。これらのiPS細胞について、未分化マーカーを免療染色やRT-PCRで、増殖をBrdUの取り込みなどで検討し、通常のiPS細胞と未分化状態における性状がかわらないことを確認した。さらにDicerを欠失させるため、Creをトランスフェクション、あるいはタモキシフェンの投与にて発現させ、Dicerが欠失することを確認している。次にこれらの細胞にmiRNAを発現させるため、様々な異なるタイプのmiRNA発現プラスミドを作成し、iPSへのトランスフェクションあるいはレトロウイルスの形にしてインフェクションを行い、培養し、miRNAが過剰発現がされるかどうかqRT-PCRを用いて検討を加えた。ウイルス、トランスフェクションいずれもあまり効率の良い過剰発現には至らず、また結果も不安定で、miRNAの過剰発現の安定した系の開発が技術的な課題として残った。意義、重要性:しかしながら、本研究で樹立したこれらのiPS細胞は、Dicerの必要性の検討のみならず、miRNAのiPSの未分化性維持、分化過程における役割を検討するためにきわめて有用なツールとなることが期待される。

Content:Dicer can be damaged in the establishment of iPS cells, Dicer-flox can be used in the establishment of iPS cells, Dicer-flox can be used in the cultivation of iPS cells, Oxt3/4,Sox2,Klf4,c-myc can be used in the establishment of iPS cells. One side, Dicer-flox These iPS cells were identified by immunotherapy staining, RT-PCR, proliferation, and BrdU selection. The Dicer is missing, Cre is missing, and the Dicer is missing. The miRNA expression in these cells was determined by the method of qRT-PCR. The miRNA expression in these cells was determined by the method of qRT-PCR. The miRNA expression in these cells was determined by the method of qRT-PCR. It is a problem for the development of technology to improve the efficiency and stability of miRNA. Significance and importance: This study establishes the importance of Dicer in iPS cell differentiation, the maintenance of undifferentiated miRNA iPS, and the differentiation process.

项目成果

Expression of Sox4 and Sox11 is regulated by multiple mechanisms during retinal development

• DOI: 10.1016/j.febslet.2012.12.017
• 发表时间: 2013-02
• 期刊: FEBS Letters
• 影响因子: 3.5
• 作者: Ayumi Usui;Toshiro Iwagawa;Yujin Mochizuki;Atsumi Iida;M. Wegner;A. Murakami;Sumiko Watanabe

The early retinal progenitor-expressed gene Sox11 regulates the timing of the differentiation of retinal cells

• DOI: 10.1242/dev.090274
• 发表时间: 2013-02-15
• 期刊: DEVELOPMENT
• 影响因子: 4.6
• 作者: Usui, Ayumi;Mochizuki, Yujin;Watanabe, Sumiko
• 通讯作者: Watanabe, Sumiko