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虚血誘導性神経幹細胞と血管内皮細胞の共培養法の応用

缺血诱导神经干细胞与血管内皮细胞共培养方法的应用

基本信息

批准号：
24930018
负责人：
土居亜紀子
金额：
$ 0.38万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24930018/
关键词：
虚血誘導性神経幹細胞血管内皮細胞

项目摘要

目的:虚血負荷による神経幹細胞(induced-Neural Stem/Progenitor Cells : iNSPC)の増殖・維持に血管内皮細胞との共培養が有効であることがわかったが、その増殖には接着系分子が関与していると考えられている。本実験では、血管内皮細胞によるiNSPC増殖に関与する因子を検索することを目的とする。方法:GFP陽性のiNSPCをGFP-トランスジェニックマウスの脳梗塞後の組織から作製し、RFP陽性血管内皮細胞はレンチウィルスベクターを用いて作製し、以下の実験を行った。まず、GFP-iNsPcとRFP-血管内皮細胞の接着共培養を行い、iNsPc増殖に最も適した培養条件を決定し、その条件で、1.iNsPcの単培養、2,iNsPCと血管内皮細胞の共培養、3.血管内皮細胞の単培養を行った。培養細胞をプレートから剥がし、セルソーター(BD FACSAria)を用いてGFP-iNSPCとRFP-血管内皮細胞の回収を行い、単培養のiNsPCと共培養のiNsPC、血管内皮細胞の回収細胞からRNAやタンパクを抽出後、細胞変化(特性)をDNAチップにより網羅的に検討するとともに、PCRやWestern blotにより検討を行った。結果:虚血負荷をかけた大脳皮質の梗塞組織を血管内皮細胞と共培養したiNspcと、単培養したiNSPCをそれぞれセルソーターにて回収しgene tipにて解析したところ、共培養、単培養どちらでも神経系マーカー以外に、α-smooth muscle actin(αSMA)やPDGFRβ、CD146などの血管周皮細胞マーカーやVE-Cadherin(CDH5)、CD31など、種々の血管系マーカーの発現も見られたが、共培養したiNSPCではNestinやPDGFRα、Tbr-2などの発現が増加し、神経幹細胞としての特性が亢進していることがわかった。考察1本実験により、iNSPCが神経系マーカー以外に血管系マーカーも強く発現していることが示唆された。このことは、iNSPCを脳修復Assay系として応用する上で極めて重要なことと思われる。今後、このiNSPCが神経系だけでなく血管系にも分化するかどうか検討し、その安定した分化誘導法の確立を行いたいと考えている。

Objective: to study the proliferation and maintenance of vascular endothelial cells (induced-Neural Stem/Progenitor Cells: iNSPC). The co-culture of vascular endothelial cells is divided into two groups. In this study, vascular endothelial cells (ECs), vascular endothelial cells (iNSPC), and vascular endothelial cells (VECs) were used to investigate the relationship between vascular endothelial cell proliferation and gene expression. Methods: after the infarction, the tissue tissue was used in GFP-induced vascular endothelial cell occlusion, and the RFP-induced vascular endothelial cell cycle was used in this study. GFP-iNsPc and RFP- vascular endothelial cells were then co-cultured, iNsPc culture conditions were determined, conditions were determined, 1.iNsPc endothelial cells were co-cultured, and 3. Vascular endothelial cells were cultured in vitro. The cells were cultured with GFP-iNSPC RFP- endothelial cells, iNsPC cells were co-cultured with iNsPC, and vascular endothelial cells were extracted from RNA cells. After extraction, the cells (characteristics) were isolated from the DNA network, and PCR cells were isolated from the DNA network. Results: the vascular endothelial cells were co-cultured with iNspc, iNSPC, gene tip, α-smooth muscle actin, α-smooth muscle actin, CD146, CDH5, CD31, et al. A variety of vascular systems have been shown to increase the concentration of iNSPC, Nestin, PDGFR α, Tbr-2, and the characteristics of cell cycle have a significant effect on the growth of blood vessels. The purpose of this study is to investigate 1 book on the vascular system outside of the iNSPC system, which indicates that the blood vessel system is abnormal. Please tell me, iNSPC, please fix the Assay system, and make sure that you are very important. From now on, the iNSPC god is responsible for the differentiation of the vascular system, the differentiation of the vascular system, the diazepam, the differentiation, the establishment and the examination of the vascular system.

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Pericyte-derived neural stem/progenitor cells induced by transient cerebral ischemia

短暂性脑缺血诱导的周细胞来源的神经干/祖细胞

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Momota Y;Nakagomi T;Doi A;Maeda M;Shibata H;Taguchi A;Tsukamoto Y;Suwa F;Kotani J;Matsuyama T
通讯作者：
Matsuyama T

Leptomeningeal-derived doublecortin-expressing cells in poststroke brain.

DOI：
10.1089/scd.2011.0657
发表时间：
2012-09
期刊：
Stem cells and development
影响因子：
4
作者：
T. Nakagomi;Z. Molnár;A. Taguchi;Akiko Nakano‐Doi;Shan Lu;Yukiko Kasahara;N. Nakagomi;T. Matsuyama
通讯作者：
T. Nakagomi;Z. Molnár;A. Taguchi;Akiko Nakano‐Doi;Shan Lu;Yukiko Kasahara;N. Nakagomi;T. Matsuyama

Establishment of Mouse Model of Post-Stroke Depression, and its Application for Drug Evaluation

小鼠脑卒中后抑郁模型的建立及其在药物评价中的应用