蛍光顕微鏡観察のための効率的な植物試料作成技術の確立と学生実習への応用

荧光显微镜高效植物样品制备技术的建立及在学生培养中的应用

• 批准号: 25909060
• 负责人: 山本 宏子
• 金额: $ 0.19万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25909060/
• 关键词: 蛍光顕微鏡; 学生実習; アグロインフィルトレーション法

1. 研究目的 : GFPに代表される蛍光タンパク質の発見などにより、蛍光顕微鏡を用いた生細胞内の分子イメージング法の発展がめざましく、学部教育においてもこれに対応した教育コンテンツの需要が高まってきている。北海道大学理学部生物学科では、LEDを光源とした蛍光正立顕微鏡45台が導入され、実習に参加する学生全員が個別に蛍光顕微鏡を使用できる環境が整備された。本研究では、植物を材料として、学生一人一人が実習用蛍光観察試料を作製するための新たな方法を確立し、これを用いて学生実習での効率的な実践を目的とする。2. 研究方法 : アグロインフィルトレーション法を用い、タバコ葉へ蛍光タンパク質遺伝子を導入し、葉の細胞内で目的タンパク質を一過的に発現させた。目的遺伝子(A)とp19遺伝子(B)を組込んだ2種類のアグロバクテリウムを各5ml培養した。培養液2mlを遠心分離し、沈殿を回収した。沈殿に2mlのインフィルトレーションバッファー(IB)を加え懸濁した。各120μlのAおよびBの懸濁液と1560μlのIBを混合し、1.8μlのアセトシリンゴン溶液を加え転倒混和した。1mlの針なしシリンジを用いて混合液をタバコ葉へ注入した。2日間生育した後、葉を蛍光顕微鏡で観察した。目的遺伝子として、GFPおよび植物の栄養応答にかかわるATL31とGFPの融合タンパク質を過剰発現させる遺伝子を用いた。同様の方法を用いて、BiFC法による細胞内におけるATL31とその相互作用因子のタンパク質相互作用の観察を行った。これらの手法を、学部3年生を対象とした実習で実践した。実習時間内で実験を行うため、事前に遺伝子を導入したアグロバクテリウム培養液を学生の人数分用意した。3. 研究成果 : 蛍光顕微鏡を用いた観察により、タバコ葉の細胞内におけるGFPの発現、ATL31の細胞内局在、およびタンパク質の相互作用が確認された。タバコ葉へ混合液を注入する際に失敗する学生もみられたため、改善方法の検討が必要である。

1. Objective: GFP represents the development of molecular biology in living cells using fluorescent microscopes, and the need for education is high. Department of Biology, Hokkaido University 45 LED light source micromirrors were introduced and used by all students. In this study, we established a new method for the preparation of plant materials and students, and used it to study the efficiency of students. 2. The method of research: the method of "green light" was used to introduce the light and protein into the leaves, and the target protein was produced in the cells of leaves. Objective: To study the effect of p19 gene (A) and p19 gene (B) on the expression of p19 gene. 2ml of culture medium for remote separation and recovery 2 ml of water and 2 ml of water. 120μl of each of A and B suspensions was mixed with 1560μl of IB, and 1.8μl of each of A and B suspensions was mixed with IB. 1ml of mixed solution 2. During the day, after giving birth, the leaves were observed by a micro-mirror. Objective: To study the expression of GFP and ATL31 in plants. The same method was used to investigate the intracellular interaction of ATL31 and its interacting factors. The third year student of the Department of Education has studied and practiced in the field. During the study period, the number of students in the culture medium was divided into three groups: 3. Results: Microscopy was used to detect the expression of GFP in the intracellular cells of ATL31, and the interaction between ATL31 and GFP was confirmed. When the mixed solution is injected, the students will be able to improve the quality of the solution.