ヒト中枢神経系における薬物代謝酵素CYP2B6の機能解析研究

人体中枢神经系统药物代谢酶CYP2B6的功能分析研究

• 批准号: 25926005
• 负责人: 小澤 秀介
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25926005/
• 关键词: 薬物代謝酵素; 中枢神経系; CYP2B6

①ヒト脳由来細胞の培養手法の確立本研究は、脳の主要構成細胞であるニューロン及びアストロサイトに焦点を当てて行った。ニューロンのモデル細胞としてヒト脳由来神経芽腫細胞SH-SY5Y, アストロサイトのモデル細胞としてヒト神経膠芽腫瘍細胞U-87MGを使用した。SH-SY5Y細胞及びU-87MG細胞はDMEM/F12+10%FBSを用い、Incubator (37℃、5%CO_2)下で培養することに成功した。以下の実験では、この培養細胞を用いて薬物代謝酵素の発現解析を行った。②ヒト脳由来細胞における薬物代謝酵素の発現解析今回、薬物代謝酵素として主要な各シトクロムP450 (CYP)分子種の解析を行った。手法として、SH-SY5Y細胞、U-87MG細胞からRNAを抽出し、逆転写反応、cDNA合成を行った後にリアルタイムPCRを行った。各CYP分子種のmRNA発現を解析した結果、SH-SY5Y細胞には、CYP1A1、1A2、1B1、2B6、2E1、2J2、3A4、3A5のmRNA発現が認められた。一方、U-87MG細胞にはCYP1A1、1A2、1B1、2B6、2C9、2C19、2E1、2J2、3A4、3A5、4F2、4F3、4F11、4F12のmRNA発現が認められた。これらの結果より、ヒト中枢神経系構成細胞であるニューロン及びアストロサイトにおいて薬物代謝酵素CYP分子種が発現していると考えられる。③フェノバルビタールがヒト脳由来細胞のCYP分子種に与える影響の検討フェノバルビタールはヒト肝臓においてCYP2B6を誘導する作用が知られている。同様に、ヒト脳由来細胞においてもフェノバルビタールによるCYP誘導作用が現れるかを検討した。各種濃度のフェノバルビタール(0㎛-100㎛)を無血清培地下でSH-SY5Y細胞、及びU-87MG細胞に暴露し、24時間後、48時間後のCYP2B6のmRNA発現量を測定した。②と同様の手法でCYP2B6のmRNA発現量を解析した結果、いずれの暴露条件下においてもCYP2B6のmRNA発現量に変化は認められなかった。以上の結果より、ヒト脳由来細胞において、フェノバルビタールによるCYP2B6の誘導作用は認められなかった。

1. Establishment of culture method of cell origin. In this study, the main components of cell origin and cell culture were studied. The cells were derived from the glioma cells SH-SY5Y, and the glioma cells U-87MG were used. SH-SY5Y cells and U-87MG cells were successfully cultured in DMEM/F12+ 10% FBS and Incubator (37℃,5% CO2). The following is an analysis of the production of enzymes that metabolize chemicals in cultured cells. (2) The analysis of the production of the enzyme of metabolism from the cell, and the analysis of the molecular species of P450 (CYP) of the enzyme of metabolism. RNA extraction, reverse transcription and cDNA synthesis were performed in SH-SY5Y cells and U-87MG cells. mRNA expression of CYP molecular species was analyzed. mRNA expression of CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, CYP2B6, CYP2E1, CYP2J2, CYP3A4, CYP3A5 was identified in SH-SY5Y cells. CYPs 1A1, 1A2, 1B1, 2B6, 2C9, 2C19, 2E1, 2J2, 3A4, 3A5, 4F2, 4F3, 4F11, 4F12 mRNA expression was also detected in U-87MG cells. As a result, the central nervous system constitutes a cell, and the metabolic enzyme CYP molecular species are developed. (3) The effect of CYP2B6 induction on CYP2B6 in the cell derived from CYP2B6 was investigated. The same is true for CYP induction in cells. CYP2B6 mRNA production was measured in SH-SY5Y cells and U-87MG cells exposed to various concentrations of CYP2B6 (0 - 100 μ g) in serum-free culture, 24 hours later and 48 hours later. 2. The mRNA expression of CYP2B6 was analyzed by the same method, and the mRNA expression of CYP2B6 was detected under different exposure conditions. The above results indicate that CYP2B6 is induced by cell culture, and that CYP2B6 is induced by cell culture.