病態時ヒト中枢神経系におけるシトクロムＰ４５０の機能解析研究

病理状态下人体中枢神经系统细胞色素P450的功能分析研究

• 批准号: 26926003
• 负责人: 小澤 秀介
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26926003/
• 关键词: 薬物代謝酵素; 中枢神経系; 病態モデル

【研究目的】本研究では、in vitroにおける中枢神経系薬物代謝モデルの構築を目的とし、ヒト中枢神経系モデル細胞を用いて、中枢神経系病態時におけるシトクロムP450(CYP)分子種の機能解析研究を行った。今回、中枢神経障害を引き起こすことが報告されている小胞体ストレス、及び酸化ストレス負荷条件下を病態モデルと位置づけ検討を実施した。【研究方法】1、ヒト脳由来細胞の培養方法本研究では、ニューロンのモデル細胞としてヒト脳由来神経芽腫細胞SH-SY5Y、アストロサイトのモデル細胞としてヒト神経膠芽腫瘍細胞U-87MGを使用した。また、以下の実験には、DMEM/F12+10%FBSを用い、Incubator(37℃、5%CO_2)下で培養した各種細胞を使用した。2、病態時におけるヒト脳由来細胞の薬物代謝酵素の発現変動解析小胞体ストレス誘発剤であるツニカマイシン、酸化ストレス誘発剤である6-ヒドロキシドパミンがヒト脳由来細胞に発現するCYP分子種に与える影響について解析を行った。各種濃度のツニカマイシン(0μg/ml-10μg/ml)、6-ヒドロキシドパミン(0μM-30μM)を無血清培地下でSH-SY5Y細胞、及びU-87MG細胞に暴露し、24時間後のRNAを抽出した。その後逆転写反応、cDNA合成を行った後にリアルタイムPCRを行い、CYP分子種のmRNA発現量を測定した。また、予備的検討よりヒト脳由来細胞で高い発現量が認められたCYP分子種(CYP1A1、1B1、2B6、2E1、2J2、46A1)に焦点を当てて検討を行った。【研究成果】酸化ストレスにより、U-87MG細胞におけるCYP1B1のmRNA発現量はコントロール群と比較して有意に惹起された。SH-SY5Y細胞においては検討した暴露条件下ではCYP分子種のmRNA発現量に変化は認められなかった。一方、小胞体ストレスにより、SH-SY5Y細胞におけるCYP2E1のmRNA発現量はコントロール群と比較して有意に抑制された。上記結果より、酸化ストレス下における中枢神経系細胞でのCYP1B1mRNA発現量、及び小胞体ストレス下におけるCYP2E1mRNA発現量が変化する可能性が示唆された。さらに、ニューロン及びアストロサイトにおいて、酸化ストレスによるCYP1B1の発現応答性が異なる可能性が示唆された。

[Research purpose] This study is conducted in It is used for the purpose of in vitro metabolism of central nervous system substances and the use of central nervous system metabolism cells.いて、Central nervous system morbidity におけるシトクロムP450 (CYP) molecular species functional analysis research を行った. This time, the central nervous system is in trouble and the report is about the central nervous system. , and the acidification of the acidic acid under load conditions, the position of the diseased material and the application of the acid. [Research Methods] 1. Culture method of cells derived from ヒト脳. This study uses では, ニューロンのモデル cells and culture methods of ヒト脳derived cells. Tumor cells SH-SY5Y and Aestoplasma stem cells and U-87MG cells were used. Various cells were cultured under the following conditions: DMEM/F12+10%FBS and Incubator (37℃, 5%CO_2). 2. The origin of disease-causing enzymes in cells is the analysis of the activity of enzymes that metabolize substances in small cells.レス発牤である6-ヒドロキシドパミンがヒト脳 origin cell It is clear that the CYP molecular species and its influence are analyzed and analyzed. Various concentrations of のツニカマイシン (0μg/ml-10μg/ml), 6-ヒドロキシドパミン (0μM-30μM ) were exposed to serum-free cultured SH-SY5Y cells and U-87MG cells, and RNA was extracted after 24 hours. It is used to perform PCR reaction, cDNA synthesis and PCR, and determine the amount of CYP molecule species in mRNA.また、The prepared 検りヒト脳 derived cell is high and the current amount is recognized められたCYP molecular species (CYP 1A1, 1B1, 2B6, 2E1, 2J2, 46A1) are all in focus. [Research Results] Acidified DNA, U-87MG cells, CYP1B1 mRNA expression, and comparison of the amount of CYP1B1 and the group, and the comparison of intentional and unintentional results. SH-SY5Y cells were exposed to various conditions and the amount of CYP molecule species was detected and the amount of mRNA was changed. On the one hand, small cell body cells, SH-SY5Y cells, and CYP2E1 mRNA expression levels were compared with each other and intentionally inhibited. The above results show that the amount of CYP1B1mRNA found in acidified ストレス下におけるcentral nervous system cells, And the possibility of changing the current amount of CYP2E1mRNA in the small cell body is not shown.さらに、ニューロン、びアストロサイトにおいて、Acidified ストレスThere is no possibility that the current response to CYP1B1 is different.