Ｃｈｙｍａｓｅによるアポリポ蛋白ＡＩの分解と粥状動脈硬化症の関連性の解明

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究の目的は粥状動脈硬化症患者の血清中にChymaseによって断片化されたapolipoprotein AI(apoAI)が存在するのか、またapoAIが分解を受けるとHDL(High density lipoprotein)粒子はどのような変化を起こすのかを解明することであった。そのために①粥状動脈患者の血清中の断片化apoAIを免疫学的手法および質量分析を用いて検出することと②HDL粒子分布の変化をとらえるために高速液体クロマトグラフィーを用いた測定系を確立することを計画していた。当初の計画では患者中の断片化したapoAIの検出はウェスタンブロット法と質量分析計を利用する予定であったが、そのためには超遠心機でHDLを分離してくる必要があった。この超遠心機によるHDLの分離はリポ蛋白の分離としてはゴールドスタンダードとなる方法ではあるが、今後多くの患者検体を処理するには煩雑かつ制限の多い方法である。一方で、HDL粒子の変化を検出するために利用する予定であったHPLC法は短時間かつ少ないサンプル量でHDLの分離が可能な方法である。そこでこのHPLC法を患者血清からのHDLの分離にも利用しようと考えた。そのため今年度は、HPLC法による血清からのHDLの分離を第一目標に実験を行った。具体的にはTSKgel lipopropakXLというゲル濾過を原理としたHPLCカラムを用いて、血清からリポ蛋白を分離した。リポ蛋白の分離を確かめるために、各フラクションの蛋白およびコレステロールの定量が必要となるが、カラムを通すことで通常の血清よりもコレステロール濃度が低くなることから通常の血清用の測定試薬ではうまく測定ができなかった。そこで試薬とサンプルの比率を変えることで低濃度のコレステロールでも測定できる測定系を確立した。その結果、血清から超遠心法に比べて格段に短時間にリポ蛋白を分離してくることに成功した。今後、この方法を用いて分離したリポ蛋白を用いて断片化apoAIの検出とHDL粒子分布の変化の解析を行う予定である。