Ｔ２Ａ配列を介して癌遺伝子とレポーター遺伝子を同時に発現させるベクターの開発

通过T2A序列同时表达癌基因和报告基因的载体的开发

• 批准号: 26931013
• 负责人: 加藤 彰
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26931013/
• 关键词: 癌画像化技術; 脳腫瘍; マウスモデル

研究の目的ウイルス受容体(tv-a)発現マウスと癌遺伝子を組込んだレトロウイルスベクター(RCAS)を用いた脳腫瘍モデル(RCAS/tv-aシステム)において、T2A配列を癌遺伝子(PDGFB)とレポーター遺伝子(mKate2、ルシフェラーゼ)の間に組込み、蛍光または発光イメージングにて腫瘍細胞を観察できるRCASベクターを開発する。研究方法T2A配列を用いたRCASベクター(RCAS-PDGFB-T2A-mKate2、RCAS-PDGFB-T2A-luciferase)は、PCR法にて作成し、RCASウイルス産生細胞(DF-1)に発現ベクターを導入した。このウイルス産生DF-1細胞をマウス脳内に注入、癌遺伝子(PDGFB)により脳腫瘍の発生したマウスを、生体イメージング用機器(IVIS)、及び蛍光顕微鏡で観察した。研究の成果RCAS-PDGFB-T2A-mKate2により発生した脳腫瘍は全て励起光により赤色蛍光を発し、RCAS-PDGFB-T2A-luciferaseにより発生した脳腫瘍は全てルシフェリン投与により発光した。mKate2については、ウエスタンブロット法及び免疫染色法で蛋白発現を調べ、腫瘍細胞内でレポーター遺伝子が高率に出現していることを確認した。これらの新規RCASベクターの使用により、脳腫瘍の増大をmKate2の蛍光またはluciferaseの発光増大として観察できるようになった。また、抗腫瘍薬(TMZ)の投与による発光減弱も観察され、薬剤効果判定に使用できることが示唆された。今回開発した「T2A配列使用によるレポーター遺伝子発現RCASベクター」により、蛍光または発光イメージングを用いた脳腫瘍細胞の同定が可能となった。本研究成果は、脳腫瘍発生機構の解明から薬剤効果の判定まで、幅広く応用できる可能性があり、非常に実用的で有意義な成果であると思われる。

Objective to study the objective of the study on the detection of cancer tolerance (tv-a), the detection of cancer tolerance, the detection of cancer tolerance, the detection of cancer tolerance (RCAS), the use of cancer tolerance (RCAS/tv-a), the allocation of cancer cells (PDGFB), the detection of cancer (mKate2), and the distribution of cancer cells (T2A). This is the first time that the RCAS has been opened in the first place since then. Methods T2A was arranged with RCAS (RCAS-PDGFB-T2A-mKate2, RCAS-PDGFB-T2A-luciferase), PCR was used to make it, and RCAS was used to induce cell growth (DF-1). The DF-1 cells were injected into the cells, the cancer cells (PDGFB) were injected into the cells, the cancer cells were injected, the cancer cells were injected, the The results of the study are RCAS-PDGFB-T2A-mKate2, full excitation, red light, RCAS-PDGFB-T2A-luciferase light, full light, and so on. The protein was detected by mKate2 assay, immunostaining method and immunostaining method, and the high rate of protein detection was confirmed by immunostaining. The new RCAS rules do not allow users to use large mKate2 light, luciferase light, and light to observe the damage. The anti-virus (TMZ) is used to indicate that the light is weak, and the result is determined. This time, the "T2A" column is configured to use the monitoring device to detect the number of RCAS messages, and to determine the possibility of using the same cell to determine the number of users. The results of this study, the results of this study, and the health institutions of this study show that the results are determined, the format is used to determine the possibility of the results, and the results are very useful.