血管平滑筋におけるリアノジン受容体アイソフォームの役割の検討

检查兰尼定受体亚型在血管平滑肌中的作用

• 批准号: 08770074
• 负责人: 村山 尚
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770074/
• 关键词: 血管; 平滑筋; リアノジン受容体; アイソフォーム

リアノジン受容体は細胞内Ca^<2+>ストアのCa^<2+>放出チャネルとして筋収縮を初めとした種々の細胞機能に重要な役割を果たしている。本研究ではアンチセンス法を用いてタンパク質の発現を抑制させることにより血管平滑筋におけるリアノジン受容体の役割を検討することを試みた。材料にはラット大動脈平滑筋を用いて、酵素処理により平滑筋細胞を単離し通常の方法で初代培養を行った。哺乳類のリアノジン受容体は現在までに3種類のアイソフォーム(RyR1-3)が知られているが、ラット大動脈には3種類すべてのアイソフォームが発現していることが示されている。マウスリアノジン受容体の各アイソフォームのC端付近をコードする塩基配列をもとにプライマーを合成し、これを用いてRT-PCR法を行った。その結果、培養平滑筋細胞においても3種類全てのアイソフォームが発現していることがわかった。しかしながら、各アイソフォームの発現量は異なっているように見えた。またリアノジン受容体に対するモノクローナル抗体を用いてウエスタンブロットを行ったところ高分子量のバンドが検出されたことからリアノジン受容体がタンパク質レベルで発現していることが示唆された。しかしながらこの抗体は全てのアイソフォームに対して反応するので今のところ発現しているアイソフォームの同定は出来ていない。現在、アイソフォーム特異的な抗体を作製している段階である。アンチセンス法に必要な各アイソフォームをコードするcDNAの5'端の塩基配列を決定するため、ウサギリアノジン受容体の塩基配列をもとにしたプライマーを用いたRT-PCR法によって得られた産物をプローブとしたスクリーニングを行っている。この塩基配列を決定した後にアンチセンスオリゴを合成して培養平滑筋細胞に投与しその効果を観察する予定である。

The cellular Ca ^ & lt;2+> of the capacitive body can be used as an important tool to cut the fruit of the cell machine. In this study, the method was used to detect the inhibition of vascular smooth tendons, capacitive body, and so on. Materials such as smooth tendons, enzymes, smooth tendons, smooth tendons, cells, smooth tendons, smooth tendons and smooth tendons. The recipients of mammalian animals are now known in RyR1-3 to know that they are suffering from health problems, such as health care and major activities. The capacitive body is divided into two parts, one by one, the other by the C-end, and the other by the RT-PCR method. The results of the experiment, the cultivation of smooth muscle cells, and the results of all kinds of experiments show that there are significant differences between the results and the results of the experiment. I don't know, I don't know. The antibody was used to detect high molecular weight, high molecular weight and high molecular weight. The antibody was detected in all cases. The antibody was detected in the whole body. Now, you have to use the specific antibodies to make sure that you don't know how to do it. It is necessary to use the RT-PCR method to determine the content of the capacitor at the 5 'end of the cDNA. This is the basis of the decision. After that, you can synthesize the smooth muscle cells and observe the predetermined conditions.

项目成果

Murayama,T.and Ogawa,Y.: "Similar Ca^<2+> dependences of[^3H]ryanodine binding to α-and β-ryanodine receptor from bullfrog skeletal muscle in an isotonic medium." FEBS Letters. 380. 267-271 (1996)

Murayama, T. 和 Okawa, Y.：“[^3H]ryanodine 与等渗介质中牛蛙骨骼肌的 α-和 β-ryanodine 受体的类似 Ca^<2+> 依赖性”，380。267。 -271 (1996)

Murayama, T., Kurebayashi, N.& Ogawa, Y.: "Stimulation by polyols of the two ryanodine receptor isoforms of frog skeletal muscle." J.Muscle Res.Cell Motility. (in press). (1997)

村山，T.，吴林，N.

Murayama, T.and Ogawa, Y.: "Properties of homotetrameric RyR3 ryanodine receptor in mammalian diaphragm muscle." Biophys.J.72-2. A169 (1997)

Murayama, T. 和 Okawa, Y.：“哺乳动物膈肌中同源四聚体 RyR3 兰尼碱受体的特性。”

Murayama, T.and Ogawa, Y.: "Properties of Ryr3 ryanodine isoform in mammalian brain." J.Biol.Chem.271-9. 5079-5084 (1996)

Murayama, T. 和 Okawa, Y.：“哺乳动物大脑中 Ryr3 ryanodine 亚型的特性。”