異種臓器移植の障害となる動物抗原の遺伝子レベルでの発現制御に関する研究

异种器官移植障碍动物抗原基因表达调控研究

• 批准号: 08770113
• 负责人: 銭田 晃一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770113/
• 关键词: 臓器移植; 拒絶反応; 糖鎖抗原; 糖転移酵素; 発現制御

ヒトに強い異種抗原となる糖鎖であるα(1,3)ガラクトース末端を有するマウス培養細胞株(F2細胞)の各種糖転移酵素の発現を遺伝子工学的に制御し、その効果を調べた。1.糖転移酵素発現ベクターの作成:動物細胞発現ベクターであるpRc/CMVベクターに(1)マウスα(1,3)Galactosyltransferase(以下α(1,3)GalT)cDNAの5'非翻訳領域〜ゴルジ膜貫通ドメイン約0.5kbをAntisense方向に組み込んだもの。(2)ヒトα(2,3)Sialytransferase cDNA ST3N,ST4,ST30の翻訳領域全長をSense方向に組み込んだもの。(3)ヒトα(1,2)Fucosyltransferase cDNAの翻訳領域全長をSense方向に組み込んだもの。(4)マウスα(1,3)GalTのの5'非翻訳領域〜ゴルジ膜貫通ドメインとヒトα(1,2)Fucosyltransferaseの活性部位のフュージョン蛋白(Sense方向でin-flameになる様に作成)を発現出来るものを作成した。2.F2細胞のトランスフェクタント細胞の作成と表面ガラクトース糖鎖の解析:上記発現ベクター及びControlとして空のpRc/CMVベクターをElectroporation法によりマウス細胞株(F2細胞)に導入し、G418耐性のstable transfectant細胞を作成した。得られたtransfectant細胞表面のガラクトース末端を有する糖鎖発現をガラクトース認識レクチン(GSI-B4)を用いたフローサイトメトリーにて解析した。その結果、(1)(2)(4)のtransfectant細胞ではガラクトース発現に軽度の低下を認めただけであったが、(3)のtransfectant細胞の中にはControlに対して平均蛍光強度が50%以下に減少したものが存在した。今回、調べた中ではマウス細胞表面ガラクトース発現を完全に、抑制し得るものは認めなかった。今後はこれらの効果の差異が見られる原因を明らかにすると共に、発現をどの程度制御すれば臨床応用可能かについて検討することが必要と思われた。

Strong ヒ ト に い heterologous antigen と な る sugar lock で あ る alpha (1, 3) ガ ラ ク ト ー ス end を have す る マ ウ ス culture cell lines (F2) の various sugar planning shift enzyme の 発 を now but 伝 sub engineering に royal し, そ の unseen fruit を adjustable べ た. 1. Sugar 発 is now planning to move enzyme ベ ク タ ー の is made: animal cell 発 now ベ ク タ ー で あ る pRc/CMV ベ ク タ ー に (1) マ ウ ス alpha (1, 3) Galactosyltransferase (alpha (1, 3) GalT) cDNA の 5 'non turn 訳 field ~ ゴ ル ジ transmembrane ド メ イ ン about 0.5 KB を A ntisense direction に group み込んだ に に に. (2)ヒトα(2,3)Sialytransferase cDNA ST3N,ST4,ST30 <s:1> translocation 訳 domain full-length をSense direction に group み込んだ み込んだ ヒト ヒト. (3)ヒトα(1,2)Fucosyltransferase cDNA <s:1> transect the full length of the 訳 domain をSense direction に group み込んだ み込んだ み込んだ に. (4) マ ウ ス alpha (1, 3) GalT の の 5 'non turn 訳 field ~ ゴ ル ジ transmembrane ド メ イ ン と ヒ ト alpha (1, 2) Fucosyltransferase の active site の フ ュ ー ジ ョ ン protein (Sense direction で - flame in に な る others に made を 発 now out る も の を made し た. 2. の F2 cells ト ラ ン ス フ ェ ク タ ン の ト cells into と surface ガ ラ ク ト ー ス sugar lock の analytic: written 発 now ベ ク タ ー and び Control と し て empty の pRc/CMV ベ ク タ ー を Electroporation method に よ り マ ウ ス cell lines (F2) に import し, G418 patience の stable transfectant cells を are made into た. Have to ら れ た transfectant cell surface の ガ ラ ク ト ー ス end を have す る sugar lock 発 now を ガ ラ ク ト ー ス know レ ク チ ン (GSI - B4) を with い た フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に て parsing し た. そ の results, (1) (2) and (4) の transfectant cells で は ガ ラ ク ト ー ス 発 now に 軽 degrees low の を recognize め た だ け で あ っ た が, (3) の transfectant cellular の に は Control に し seaborne て が below 50% average 蛍 light intensity に reduce し た も の が exist し た. In this back, adjustable べ た で は マ ウ ス cell surface ガ ラ ク ト ー ス 発 を に completely now, inhibit し る も の は recognize め な か っ た. Future は こ れ ら の unseen fruit の differences が see ら れ る reason を Ming ら か に す る と に, 発 now を ど の degree suppression す れ ば clinical 応 may use か に つ い て beg す 検 る こ と が と thought necessary わ れ た.

项目成果

Suguru,Akamatsu: "Elevation of an α (1,3) fucosyltransferase activity correlated with apoptosis in the human colon adenocarcinoma cell line,HT-29." Glycoconjugate Journal. 13. 1021-1029 (1996)

Suguru, Akamatsu：“α (1,3) 岩藻糖基转移酶活性的升高与人结肠腺癌细胞系 HT-29 中的细胞凋亡相关。糖复合物杂志”13. 1021-1029 (1996)。