細胞におけるグルタチオン-シスプラチン結合体の形成と排出機構の解明

阐明细胞内谷胱甘肽-顺铂缀合物的形成和排泄机制

• 批准号: 08770105
• 负责人: 後藤 信治
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770105/
• 关键词: グルタチオン; シスプラチン; 薬剤耐性; グルタチオン S-トランスフェラーゼπ

1.実験方法ヒト培養癌細胞株として、卵巣癌細胞、大腸癌細胞と各々のシスプラチン(CDDP)耐性株を用いた。細胞でのGlutathione S-transferaseπ(GSTπ)のmRNA及びタンパク質の発現は、Northern blot法とWestern blot法により解析した。グルタチオン-シスプラチン結合体(DDP-GSH)の形成量測定は、HPLCを用いて行った。更に、ヒト胎盤からGSTπを分離精製しGSTπのCDDP-GSH結合反応への関与を検討した。2.結果GSTπのmRNA及びタンパク質の発現は、各々の耐性株で親株より有意に増加しており、CDDPに対する耐性度に相関していた。GSTπの酵素活性阻害剤として既に報告されている、エタクリン酸またはケトプロフェンをCDDPと同時に細胞に投与すると、CDDP単独投与の場合と比較して、細胞内でのDDP-GSHの形成量が有意に減少した。in vitroでのDDP-GSH形成反応は酵素非存在下でも緩徐に進行することが既に報告されているが、ヒト胎盤から分離精製したGSTπを結合反応系に添加すると、酵素非存在下の場合と比較して結合体の形成量が有意に増加した。形成量は、酵素量依存性に増加した。これらのことより、GSTπは、DDP-GSH形成反応を触媒することが明らかとなった。更に、CDDP耐性細胞でのDDP-GSH形成能増加は、GSTπの発現増加によることが示唆され、GSTπがCDDPの解毒に関与することが示唆された。以上の知見に関しては、現在、論文を投稿中である。また、今回使用した細胞株では、多剤薬剤耐性関連タンパク質(MRP)とは、明らかに分子量が異なるCDDP-GSHの膜輸送タンパク質が、耐性株に高発現していることが判明した。その膜輸送体の構造解析に関しては、現在、精製に関する基礎実験の段階である。

1. Be 験 method ヒ ト develop cancer cells と し て, egg 巣 cancer, colorectal cancer cell と 々 の シ ス プ ラ チ ン (CDDP) patience strains を い た. Cellular で <s:1> Glutathione S-transferaseπ(GSTπ) <s:1> mRNA and びタ パ パ パ in the posterior tissue of the gland, Northern blot method とWestern blot method によ analysis of <s:1> た. The determination of the <s:1> formation amount of the グ, タチ, and <s:1> of the <s:1> -シスプラチ complex (DPP-GSH) was carried out using て and HPLCを. Further に and ヒト placenta ら らGSTπを to separate and refine <s:1> GSTπ <s:1> CDDP-GSH, and to combine it with 応へ 応へ and を検 to discuss た. 2. The GST PI の mRNA and び タ ン パ ク qualitative の 発 は now, various 々 の patience seedlings よ で pro り intentionally に raised plus し て お り, CDDP に す seaborne る degree of patience に phase masato し て い た. GST PI の enzyme active resistance against tonic と し て に report both さ れ て い る, エ タ ク リ ン acid ま た は ケ ト プ ロ フ ェ ン を CDDP と cast with the cellular に に す る と, CDDP 単 alone vote compared with の occasions と し て, intracellular で の DDP - GSH の formation decrease が intentionally に し た. The in vitro で の DDP - GSH formed the 応 は enzymes under non existence で も slow to す xu に る こ と が に report both さ れ て い る が, ヒ ト placenta か ら separation of refined し た GST PI を combined anti 応 department に add す る と, と の occasions in the presence of enzymes than comparison し て combination の formation in が intentionally に raised add し た. The formation amount に and enzyme amount dependence に increase the た. The anti応 を catalyst する とが とが, GSTπ となった and DDP-GSH form ら ら となった となった. More に, CDDP patience cell で の DDP - GSH can form good は, GST PI の 発 now rights に よ る こ と が in stopping さ れ, GST PI が CDDP の detoxification に masato and す る こ と が in stopping さ れ た. The above knowledge is related to に て て, currently, and the paper を is being submitted である. ま た, today back to use し た cell lines で は, tonic 薬 tonic patience masato even タ ン パ ク mass (MRP) と は, Ming ら か に が different molecular weight な る CDDP - GSH の membrane transport タ ン パ ク qualitative が, high tolerance plant に 発 now し て い る こ と が.at し た. The analysis of the structure of the そ <s:1> membrane carrier <e:1> に is related to the て に, and now, the refinement of the に is related to the する basic experiments である.