蛋白発現細胞株を使ったヌクレオキャプシド構成蛋白の解析

使用蛋白质表达细胞系分析核衣壳组成蛋白

• 批准号: 08770213
• 负责人: 西尾 真智子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770213/
• 关键词: パラインフルエンザウイルス; 蛋白発現細胞株; モノクローナル抗体; P蛋白; NP蛋白

1.既に樹立したパラインフルエンザ2型ウイルスのNP蛋白を構成的に発現している細胞、P蛋白を構成的に発現している細胞、NP蛋白とP蛋白両蛋白を発現している細胞を使って、in vivoとin vitro両方でNP蛋白とP蛋白がcomplexを作っていることを明らかにした。2.パラインフルエンザ2型ウイルスのNP蛋白を構成的に発現している細胞にいろいろなtruncated P蛋白を発現させ、P蛋白のどの部分がNP蛋白と結合するかを検討した。その結果、P蛋白に2ヵ所NP蛋白と結合する領域があることが解り、1ヵ所はN末側1〜47アミノ酸の領域、もう1ヵ所はC末側357〜395アミノ酸の領域であった。3.両蛋白を構成的に発現している細胞を蛍光抗体で染めると感染細胞を染めたときと同じようにgranular patternを示す。NP蛋白とN末側を削ったP蛋白を共に発現している細胞でも同様のgranular patternを示すが、NP蛋白とC末側を削ったP蛋白を同時に発現している細胞を染めると違った蛍光像(diffuse pattern)を示した。これはNP蛋白、或いはP蛋白を単独に発現させた細胞を染めた蛍光像に似ていた。4.P蛋白のNP蛋白と結合することが解った領域を認識するモノクローナル抗体を使って両蛋白の結合を抑制することができるかどうかを調べた。C末側の結合領域を認識するモノクローナル抗体である57-1Aは結合を抑制した。しかし、N末側の結合領域を認識するモノクローナル抗体である13-1Aは抑制できなかった。5.いろいろなtruncated NP蛋白を発現して、NP蛋白に対するモノクローナル抗体のマッピングを行なった。

1. The expression of NP protein and P protein in cells composed of NP protein and P protein was found in cells composed of NP protein and P protein. 2. The expression of truncated P protein in cells formed by NP protein in type 2 cells is discussed. As a result, P protein binds to NP protein 2 in the domain of 1 ~ 47 amino acids at the end of N, and 1 ~ 357 amino acids at the end of C. 3. The expression of protein in the cells was detected by fluorescent antibody. NP protein and P protein are detected in the same granular pattern in the middle of the cell. NP protein and P protein are detected in the middle of the cell. The NP protein, or P protein, was found in the cells. 4. Protein binding to NP protein is regulated by antibody. The binding domain of C terminal is recognized by the antibody 57-1A. 13-1A is the binding domain on the terminal side. 5. Truncated NP protein development, NP protein response, antibody response

项目成果

Kousuke Okamoto: "An anti-fusion regulatory protein-1 monoclonal antibody suppresses human parainfluenza virus type 2-induced cell fusion" Journal of General Virology. 78. 83-89 (1997)

Kousuke Okamoto：“抗融合调节蛋白 1 单克隆抗体可抑制人副流感病毒 2 型诱导的细胞融合”《普通病毒学杂志》。

Noriko Watanabe: "Binding of the V proteins to the nucleocapsid proteins of human parainfluenza type 2 virus" Medical Microbiology and Immunology. 185. 89-94 (1996)

Noriko Watanabe：“V 蛋白与人副流感 2 型病毒核衣壳蛋白的结合”医学微生物学和免疫学。

Shinji Ohgimoto: "Regulation of human immunodificiency virus gp 160-mediated cell fusion by antibodies against fusion regulatory protein 1" Journal of General Virology. 77. 2747-2756 (1996)

Shinji Ohgimoto：“通过针对融合调节蛋白 1 的抗体调节人类免疫缺陷病毒 gp 160 介导的细胞融合”《普通病毒学杂志》。

Machiko Nishio: "Interaction between nucleocapsid protein (NP) and phosphoprotein (P) of human parainfluenza virus type 2 : one of the two NP binding sites on P is essential for granule formation" Journal of General Virology. 77. 2457-2463 (1996)

Machiko Nishio：“人类副流感病毒 2 型核衣壳蛋白 (NP) 和磷蛋白 (P) 之间的相互作用：P 上的两个 NP 结合位点之一对于颗粒形成至关重要”《普通病毒学杂志》。