慢性関節リウマチ滑膜における接着分子を介した炎症性サイトカイン産生増強機構の解析

类风湿性关节炎滑膜中粘附分子增强炎症细胞因子产生的机制分析

• 批准号: 08770350
• 负责人: 齋藤 和義
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770350/
• 关键词: 慢性関節リウマチ; サイトカイン; IL-1β; 転写因子; 細胞接着; ICAM-1; 滑膜細胞; 遺伝子発現調節

1)ICAM-1、VCAM-1を介する炎症性サイトカイン(IL-1,6,8,TNFα)の発現誘導の検討a)RA患者滑膜細胞、RA由来滑膜細胞株E11より無刺激状態においてIL-1,6,TNFαの発現が認められた。b)RA患者滑膜細胞およびE11上には無刺激状態でICAM-1分子の発現が認められた。IFN-γ添加にてICAM-1の発現は増強し、VCAM-1の発現が新たに誘導された。c)RA患者滑膜細胞およびE11をホルマリン固定したTリンパ球(PMAにてインテグリンを活性化した後固定)と混合培養、あるいは滑膜細胞上のICAM-1,VCAM-1分子を抗ICAM-1抗体、抗VCAM-1抗体にてクロスリンクすることによりIL-1,6,TNFαの発現が増強した。2)接着分子を介する刺激により活性化される核内因子の検索AP-1、NFkB、CREB、NFIL-6など既にいくつかの炎症性サイトカインの遺伝子発現に重要な核内因子の結合モチーフをタンデムに数個もつCATベクターをトランスフェクションし、ICAM-1分子を抗体にてクロスリンク刺激した時のCAT活性を検討したところ、AP-1結合部位を含むもののみ有意なCAT活性増強が認められた.3)接着分子を介する刺激に反応するIL-1βの遺伝子調節領域の同定a)E11において、ICAM-1分子を介する刺激に応答するIL-1β遺伝子調節領域は、転写開始部位より約3000bp上流に存在する約400bpの領域であった。この領域に存在するAP-1結合部位がIL-1β刺激時のIL-1β転写誘導に重要な働きをしていることが明らかとなった.b)ICAM-1刺激に応答するIL-1β遺伝子調節領域のDNAをプローベとしてバンドシフトアッセイを行ったところ、刺激によりAP-1蛋白が活性化されプローベに結合することを確認した.以上より慢性関節リウマチ滑膜細胞においては、サイトカインなどの可溶性分子による刺激に加えて、周囲の細胞との接着を介して炎症性サイトカイン遺伝子の発現調節が行われており、炎症の持続遷延に関与している事が示唆された。

1) The induction of inflammatory cytokines (IL-1,6,8,TNFα) mediated by ICAM-1 and VCAM-1; a) The induction of IL-1,6,TNFα in synovial cells of RA patients and synovial cell line E11 derived from RA in non-stimulated state. b) Expression of ICAM-1 in synovial cells of RA patients without stimulation on E11 is recognized. The expression of ICAM-1 was enhanced and VCAM-1 was induced by IFN-γ addition. c) The expression of ICAM-1,VCAM-1 molecules, anti-ICAM-1 antibodies, anti-VCAM-1 antibodies, IL-1,6,TNF-α increased in synovial cells from RA patients after mixed culture and immobilization of E11 and T-spheres (PMA activation followed by immobilization). 2)Next, the activation of intracellular factors AP-1, NFkB, CREB, NFIL-6, and the development of inflammatory cytokines are important for the binding of intracellular factors. Several CAT molecules are activated by molecular stimuli. The activity of CAT is detected by antibodies to ICAM-1 molecules. The presence of the AP-1 binding site may be responsible for increased CAT activity. 3) Identification of the IL-1 β gene regulatory domain in response to subsequent molecule-mediated stimulation. a) The IL-1 β gene regulatory domain in response to E11 and ICAM-1 molecule-mediated stimulation is also present in a region of approximately 400bp upstream from the writing start site, approximately 3000bp upstream. The presence of AP-1 binding sites in this domain is important for IL-1 β gene induction in response to IL-1β stimulation.b) Identification of AP-1 protein activation in response to ICAM-1 stimulation. The above results indicate that the regulation of the expression of soluble molecules in synovial cells of chronic joint inflammation is related to the persistence of inflammation and inflammation.

项目成果

Tanaka,Y.: "Heparan sulfate proteoglycan on leukemic cells is primarily involved in integrin-triggering and its mediated adhesion to endothelial cells" J. Exp. Med.184巻. 1987-1997 (1996)

Tanaka, Y.：“白血病细胞上的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖主要参与整合素触发及其介导的与内皮细胞的粘附”J. Exp Med 184。 1987-1997 (1996)

Tanaka,Y.: "Osteoblasts are regulated by the cellular adhesion through ICAM-1 and VCAM-1." J. Bone Miner. Res.10巻. 1462-1469 (1995)

Tanaka, Y.：“成骨细胞通过 ICAM-1 和 VCAM-1 进行调节。”J. Bone Miner Res。

Koyama,Y.: "Cross-linking of intercellular adhesion molecule 1 (CD54) induces AP-1 activation and IL-1 β transcription" J. Immunology. 157巻11号. 5097-5103 (1996)

Koyama，Y.：“细胞间粘附分子 1 (CD54) 的交联诱导 AP-1 激活和 IL-1 β 转录”J. 免疫学，第 157 卷，第 11 期。5097-5103 (1996)

Wake,A.: "Calcium-dependent homotypic adhesion through leukocyte function-associated antigen-1/intercellular adhesion molecule-1 induces interleukin-1 and parathyroid hormone-related protein production on adult T-cell leukemia cells in vitro." Blood. 86巻.

Wake, A.：“通过白细胞功能相关抗原 1/细胞间粘附分子 1 进行的钙依赖性同型粘附可在体外诱导成人 T 细胞白血病细胞产生白介素 1 和甲状旁腺激素相关蛋白。”卷。

Abe,M.: "Regulation of interleukin (IL)-1 β gene transcription induced by IL-1 β in rheumatoid synovial fibroblast-like cells,E11,transformed with simian virus 40 large T antigen" J. Rheumatology. 24(in press). (1997)

Abe，M.：“用猿猴病毒 40 大 T 抗原转化的类风湿滑膜成纤维细胞样细胞 E11 中 IL-1 β 诱导的白细胞介素 (IL)-1 β 基因转录的调节”J. 风湿病学 24（出版中）。 ）（1997）。