慢性関節リウマチ滑膜細胞の接着分子を介した細胞内シグナル伝達機構の解析

类风湿关节炎滑膜细胞粘附分子介导的细胞内信号转导机制分析

• 批准号: 09770336
• 负责人: 齋藤 和義
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770336/
• 关键词: 慢性関節リウマチ; 滑膜細胞; ICAM-1; VCAM-1; 転写因子; 細胞接着; MAPK

滑膜細胞上のICAM-1、VCAM-1にそれらに対するマウスmAb(一次抗体)を結合させ、さらに抗マウスIgG抗体(二次抗体)で架橋形成することで刺激したところ、下記の事実が明らかとなった。1. ICAM-1、VCAM-1を介する刺激によりIL-1β、IL-6の遺伝子発現、蛋白産生が起こることをnorthern blotting、ELISAにて確認した。2. さらに、これらの遺伝子発現に関与する転写因子の活性化をEMSAにて検討したところ、AP-1およびNF-IL6の活性化が刺激後に見られること、CREB,NFkB,STAT等は活性化されないことが明らかとなった。3. AP-1およびNF-IL6の活性化に共通して関与する上流のkinaseについて検討したところ、ICAM-1を介する刺激により5-15分でMAPKの急峻な活性化が認められ、60分では前値に戻るごとが明らかととなった。また、この時に活性化されるMAPKはERK-1,2であり、p38およびJNKは関与していない事をkinase assayおよび抗リン酸化ERK-1,2、p38、JNK抗体を用いたwestern blottingにて確認した。4. このシグナル伝達活性化機構は、OAの滑膜細胞、線維芽細胞株、ICAM-1の発現ベクターを遺伝子導入して作成したCOS細胞などにおいてはほとんど認められなかった事よりRA滑膜細胞の異常活性化に基づく事象であることが示唆された。以上のように、ICAM-1は単にそのリガンドであるLFA-1,Mac-1を介した細胞接着のみならず、リガンドよりシグナルを受ける細胞上分子として機能し得ることが明らかとなった。

ICAM-1 and VCAM-1 on synovial cells are bound to the same mAb (primary antibody) The anti-mask IgG antibody (secondary antibody) is used to form a bridge to stimulate the immune system, and the next activity is to stimulate the immune system. 1. ICAM-1 and VCAM-1 are stimulated by IL-1β and IL-6, and protein production is detected by northern blotting and ELISA confirmation. 2.さらに, これらの缝子発appears and the する転WRITE factor is activated をEMSA にて検question したところ, AP-1 およびNF-I L6 is activated after stimulation, and CREB, NFkB, STAT, etc. are activated after stimulation. 3. AP-1およびNF-IL6のactivation common common and high-flow kinaseについて検検したところ、ICAM-1でするstimulation により 5-15 minutes でMAPKの Rapid activation が められ, 60 minutes では前〤 に戻るごとが明らかととなった.また、この时にactivationされるMAPKはERK-1,2であり、p38およびJNKは关与していない事をkinase The assay was performed using anti-Rinolylated ERK-1,2, p38, and JNK antibodies and was confirmed by western blotting. 4. C OS Cell などにおいてはほとんど cognizeめられなかった事よりRA Abnormal activation of synoviocytes is a symptom of abnormal activation of synovial cells. The above のように, ICAM-1 は単にそのリガンドであるLFA-1, Mac-1 は単た cells were followedのみならず、リガンドよりシグナルをReceived the molecular として function on the cells and got the ることが明らかとなった.

项目成果

Y.Tanaka: "Heparan sulfate proteoglycan on endothelium efficiently induces integrinmediated T cell adhesion by immobilizing chemokines in rheumatoid synovitis" Arthritis.Rheum. (in press).

Y.Tanaka：“内皮上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖通过固定类风湿性滑膜炎中的趋化因子，有效诱导整合素介导的 T 细胞粘附”Arthritis.Rheum。

K.Fujii: "Cross-liking of CD44 on rheumatoid synovial Cells up-regulates VCAM-1" J.Immunol.162(4). 2391-2398 (1999)

K.Fujii：“CD44 对类风湿滑膜细胞的交叉作用上调 VCAM-1”J.Immunol.162(4)。

Y.Tanaka: "CD49d Workshop Panel report" In Leukocyte Typing VI(ed.by Kishimoto,T.,et al.),Garland Publising,New York, 3 (1997)

Y.Tanaka：“CD49d 研讨会小组报告”在白细胞分型 VI（由 Kishimoto,T.,et al. 编辑），Garland 出版公司，纽约，3 (1997)