Nuclear Factor kappa B (NF-κB)の発現機構におけるプロテアーゼの役割

蛋白酶在核因子κB (NF-κB)表达机制中的作用

• 批准号: 08770509
• 负责人: 小口 朝彦
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770509/
• 关键词: 転写; プロテアーゼ; NF-κB; VCAM-1

1、研究目的:NF-κBはvascular cell adhesion molecule(VCAM)-1など種々の遺伝子の転写調節機構に関与する蛋白質である。ある種のプロテアーゼ阻害薬はその活性化を抑制することが示されている。私たちはNF-κBの発現機構におけるプロテアーゼの役割について検討した。2、研究方法:ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を実験に用いた。NF-κBの活性はゲルシフトアッセイ(EMSA)にて検討した。プローベはヒトVCAM-1遺伝子プロモーター領域に存在するNF-κB様領域をもとに作成した。3、研究成績:(1)TNFα(tumor necrosis factor α,100U/ml)で60分間刺激したHUVECから抽出した細胞質蛋白成分(TNF:CE)と静止状態のHUVECから抽出した核蛋白成分(R:NE)をin vitroで混合すると、NF-κBの有意な発現を誘導できることをまず観察した。(2)HUVECをプロテアーゼ阻害薬TPCK(tosyl-phe-chloromethylketone,25μM)で90分間培養し抽出した核蛋白成分(TPCK:NE)とTNF:CEをin vitroで混合し、EMSAを施行したがNF-κBの発現を認めなかった。TPCK(25μM)で30分間前処置した後TNFα(100U/ml)を加え60分間HUVECを刺激した。この細胞から抽出した細胞質成分(TPCK:TNF:CE)とR:NEをin vitroで混合しても、NF-κBの発現を認めなかった。4、結論:核内および細胞質内プロテアーゼ活性は共にNF-κBの活性化に必須であること、両者が同一ものか否か不明であるが共にTPCK依存性で類似のキモトリプシン様プロテアーゼ活性を持つことが推測される。

1. Objective:NF-κB is involved in vascular cell adhesion molecule(VCAM)-1 and protein regulation of gene expression. This is the first time that a plant has been identified. The NF-κB gene was detected by the detection system. 2. Methods: Umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were used in this study. NF-κB activity is determined by EMSA. The VCAM-1 gene expression domain exists and NF-κB gene expression domain exists. 3. Results:(1)TNFα(tumor necrosis factor α,100U/ml) stimulated HUVEC to extract cytoplasmic protein component (TNF:CE) and nuclear protein component (R:NE) in vitro, NF-κB induced intentionally. (2)HUVEC cells were cultured for 90 minutes to extract nuclear protein components (TPCK:NE), TNF:CE, and EMSA. TNFα(100U/ml) was added to HUVEC after 30 minutes of treatment with TPCK(25μM). Cytoplasmic components (TPCK:TNF:CE) and R:NE in vitro are mixed and NF-κB is expressed. 4. Conclusion: The nuclear and cytoplasmic transcription factors are necessary for NF-κB activation, but the same factor is unknown.