ヒト血管内皮細胞における接着分子VCAM-1の転写調節機構

人血管内皮细胞粘附分子VCAM-1的转录调控机制

• 批准号: 07770528
• 负责人: 小口 朝彦
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770528/
• 关键词: 転写因子; NF-kappa B; 接着分子

〈方法〉Vascular Cell Adhesion Molecule(VCAM)-1遺伝子の転写調節領域に存在するNF-κB様塩基配列をもとに、double strand DNAを作成しこれをprobeとした。ヒト臍帯静脈内皮細胞を培養し、tumor necrosis factor(TNF)-αで刺激し、NF-κBの活性をelectrophretic mobility shift assay(EMSA)にて検討した。NF-κBの阻害薬剤としてプロテアーゼインヒビターであるTPCK(Tosyl-Phe-chloromethylketone)を用い、これがNF-κBの活性化機構にどの様な影響を及ぼすかを前述のprobeを用いてEMSAで検討した。〈結果〉TNF-αで刺激された細胞の核抽出物を用いた検討ではTPCK(25μM)はTNF-αによるNF-κBの活性化をほぼ完全に抑制した。非刺激ヒト臍帯静脈内皮細胞からの核抽出成分と、TNF-αで刺激されたヒト臍帯静脈内川細胞からの細胞質抽出成分とを混合すると著名なNF-κBの活性化を認める事が観察された。ATPによる試験でこのNF-κBはTNF-α刺激後の細胞質成分に存在することが判明した。TNF-αで刺激する前にTPCK(25μM)で処理した後に細胞質成分を抽出し、これを核抽出成分と混合してもNF-κBの発現は認められなかった。また、TPCK(25μM)で前処置した後に抽出された核抽出成分と、TNF-αで刺激された細胞からの細胞質抽出物を混合してもNF-κBの活性は認められなかった。〈結果〉TNF-αで刺激した細胞の細胞質成分にはまだNF-κBが存在していること。NF-κBの発現には細胞質内、核内の各々におけるプロテアーゼ活性が必須であることが示唆された。

> < method Vascular Cell Adhesion Molecule (VCAM) - 1 heritage 伝 son の planning, regulating field exist に す る nf-kappa B others in salt base with column を も と に, double strand DNA を made し こ れ を probe と し た. Youdaoplaceholder0 umbilical vein endothelial cell を culture, tumor necrosis factor(TNF)-αで stimulation, NF-κB <s:1> activity をelectrophretic mobility shift assay(EMSA)にて検 discussion on た. The nf-kappa B の resistance against 薬 tonic と し て プ ロ テ ア ー ゼ イ ン ヒ ビ タ ー で あ る TPCK (Tosyl - Phe - chloromethylketone) を い, こ れ が nf-kappa B の activeness institutions に ど の others な influence を and ぼ す か を aforesaid の probe を with い て EMSA で beg し 検 た. > < results TNF alpha で stimulus さ れ の た cell nuclear extract を with い た beg で 検 は TPCK (25 microns) は TNF alpha に よ る nf-kappa B の activeness を ほ ぼ に completely inhibit し た. Not stimulate ヒ ト umbilical 帯 venous endothelial cells か ら の nuclear spare components と, TNF alpha で stimulus さ れ た ヒ ト umbilical 帯 intravenous sichuan cells か ら の cytoplasm spare components と を mixed す る と famous な nf-kappa B の activeness を recognize め る matter が 観 examine さ れ た. The ATPによる test shows the に presence of <s:1> cytoplasmic components に after stimulation with NF-κB and TNF-α, which indicates that た た. Before the TNF alpha で stimulus す る に TPCK (25 microns) で 処 Richard し た に cytoplasm components を drew し, after こ れ を nuclear spare components と mixed し て も nf-kappa B の 発 は now recognize め ら れ な か っ た. ま た, TPCK (25 microns) で 処 before buy し た に pulled out after さ れ た nuclear spare components と, TNF alpha で stimulus さ れ た cells か ら の cytoplasm extract を mixed し て も nf-kappa B は の activity recognition め ら れ な か っ た. < Result > TNF-αで stimulated the presence of <s:1> cytoplasmic components に まだ and NF-κBが in <s:1> て る る る と と of た cells. Nf -κ b が was present. The activity of NF-κB in the cytoplasm and nucleus is 々におけるプロテア ゼ ゼ ゼ が が and it must be である とが とが and とが to stimulate された.