心筋小胞体カルセクエストリン遺伝子の構造の解明

心脏内质网钙铁蛋白基因结构的阐明

基本信息

  • 批准号:
    08770505
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.7万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

平成8年度においては心臓における心臓の筋小胞体(SR)の中にあるCa^<2+>結合蛋白であるカルセクエストリン(CS)遺伝子の解析の研究を行った。ウサギSRのCS遺伝子のcDNA制限酵素断片をP^<32>でラベルしたプローブを用いてλファージ・ウサギ・ゲノム・ライブラリーをスクリーニングした結果、6個の異なるポジティブクローンを得た。その中で3個は、制限地図とサザンブロッティングにより解析し、遺伝子内のエクソンの分布を決定した。一方、他の3個のクローンについては、プライマーを用いてエクソン・イントロン境界を明らかにした。又、サブクローニングしたDNA断片の塩基配列をウサギ心筋小胞体CScDNAと比較することで単離された6個の相異なるゲノムDNAクローンがウサギ心筋小胞体CS遺伝子であることを確定することができた。心筋小胞体CS遺伝子のエクソンの分布は、白筋小胞体CS遺伝子のエクソンの分布に近似していた。また、エクソン2、3、4、5、6、7、8、9、10の大きさは、各々87bp、98bp、111bp、74bp、131bp、46bp、55bp、101bp、75bpで白筋小胞体CS遺伝子と同じ大きさであった。本研究は、昨年度日本循環器学会総会において発表した。しかしながら、エクソン1については、本年は見つけることができなかった。ライブラリーについては数種類のものを用いたがだめであった。スクリーニングの効率を上げるために、現在、PCRにより、エクソン1の部分のみを増幅したプローブを作製しスクリーニング中である。今後、心臓のSRのCS遺伝子の5'領域について制限地図とシークエンスによって詳細に解析する。その後、転写開始点を明らかにしコンピューター解析により転写開始点より上流のプロモーターとシス作用エレメントの解析を行い、プロモーターと5'上流域の塩基配列を、白筋小胞体CS遺伝子と比較する。組織特異的な発現を実証するプロモーターと、シスDNAエレメントを同定する。このために、サブクローニングした5'上流域の塩基配列を各種cell lineに導入し、発現ベクターにて機能解析を行う。その後、ゲルシフト分析、ウェスタンブロット、DNAフットプリント法によりDNA結合蛋白質を解析することにより、心筋小胞体CS遺伝子のDNA制御塩基配列を解析する。これらの実験により、5'上流に位置したDNA制御塩基配列が心臓特異的遺伝子の発現制御に関連した核蛋白質に結合するかどうか確かめたい。
Pp.47-53 8 annual に お い て は heart viscera に お け small perforatien の る heart muscle cell body (SR) の に あ る Ca ^ 2 + > < binding protein で あ る カ ル セ ク エ ス ト リ ン (CS) heritage 伝 son の parsing の を line っ た. Son ウ サ ギ SR の CS heritage 伝 の limitations cDNA enzyme fragment を P ^ < > 32 で ラ ベ ル し た プ ロ ー ブ を with い て lambda フ ァ ー ジ · ウ サ ギ · ゲ ノ ム · ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し た results, six の different な る ポ ジ テ ィ ブ ク ロ ー ン を た. そ の で in three は, limitations 図 と サ ザ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り parsing し inside, but 伝 の エ ク ソ ン の distribution を decided し た. Side, he の 3 の ク ロ ー ン に つ い て は, プ ラ イ マ ー を with い て エ ク ソ ン · イ ン ト ロ ン realm を Ming ら か に し た. Again, サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し た DNA fragment の salt base with column を ウ サ ギ small heart muscle cell body CScDNA と compare す る こ と で 単 from さ れ た six の dissimilar な る ゲ ノ ム DNA ク ロ ー ン が ウ サ ギ small heart muscle cell body CS heritage 伝 son で あ る こ と を determine す る こ と が で き た. Small heart muscle cell body CS heritage 伝 son の エ ク ソ ン は の distribution, small white muscle cell body CS heritage 伝 son の エ ク ソ ン の distribution に approximate し て い た. ま た, エ ク ソ ン 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 large の き さ は, each 々 87 bp and 98 bp and 111 bp and 74 bp and 131 bp, 46 bp, 55 bp and 101 bp and 75 bp で small white muscle cell body CS heritage 伝 と son with big じ き さ で あ っ た. This study 総 and the previous year 's publication by the Japanese circulator society 総 にお て て て た. し か し な が ら, エ ク ソ ン 1 に つ い て は, see this year は つ け る こ と が で き な か っ た. The types of ラ ラ ブラリ に に に ラ て て に number types <s:1> を を を を use たがだめであった たがだめであった. ス ク リ ー ニ ン グ の sharper rate on を げ る た め に, now, the PCR に よ り, エ ク ソ ン part 1 の の み を rights of し た プ ロ ー ブ を cropping し ス ク リ ー ニ ン グ in で あ る. In the future, the detailed に analysis of the map of the 伝 sub-region 5' in the field of the SR and CS of the cardiac nucleus, the に 伝 て て て て limitation map of the とシ <s:1> <s:1> エ エ スによって スによって スによって スによって スによって スによって スによって スによって of する in the field of the cs, will be conducted. そ の, planning to write after starting point を Ming ら か に し コ ン ピ ュ ー タ ー parsing に よ り planning write starting point よ り upper の プ ロ モ ー タ ー と シ ス role エ レ メ ン ト の parsing を い, プ ロ モ ー タ ー と 5 'on basin の salt base with column を, small white muscle cell body CS heritage 伝 と comparing す る. Tissue specific な 発 を now be card す る プ ロ モ ー タ ー と, シ ス DNA エ レ メ ン ト を with fixed す る. こ の た め に, サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し た 5 'on basin の salt base with column を various cell line に import し, 発 ベ ク タ ー に う analytical を て function. After そ の, ゲ ル シ フ ト analysis, ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト, DNA フ ッ ト プ リ ン ト method に よ り DNA binding protein を parsing す る こ と に よ り, small heart muscle cell body CS heritage 伝 の royal salt making base with DNA sequence を parsing す る. こ れ ら の be 験 に よ り, 5 'upstream に position し た DNA suppression salt base with column が heart viscera specific heritage 伝 son の 発 now suppression に masato even し た nuclear protein に combining す る か ど う か か indeed め た い.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kenichi Yana: "STRUCTURAL ORGANIZATION OF THE RABBIT CARDIAC SR CALSEQUESTRIN GENE" J.Biol.Chem.Suppl.170. 235 (1993)
Kenichi Yana:“兔心脏 SR CALSEQUESTRIN 基因的结构组织”J.Biol.Chem.Suppl.170。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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Yano,K.:“肌浆网钙螯合蛋白:结构和功能特征”Mol.Cell.Biochem。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
矢野健一: "ウサギ心筋小胞体(SR)カルセクエストリン(CS)遺伝子の構造" jap.Cir.J.Suppl.60. 456 (1996)
Kenichi Yano:“兔心脏内质网(SR)钙螯合蛋白(CS)基因的结构”jap.Cir.J.Suppl.60(1996)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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