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心筋筋小胞体Triadinの機能解明とカルセクエストリン遺伝子の構造解析

心肌肌浆网 Triadin 功能的阐明和 calsequestrin 基因的结构分析

基本信息

批准号：
09770490
负责人：
矢野健一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770490/
关键词：
心臓筋小胞体トライアジンカルシウム triadin Calsequestrin 心筋小胞体

项目摘要

心筋の筋小胞体に存在するCa制御蛋白質triadinの機能を解明するため、本研究を行った。triadinはryanodine receptorとcalsequestrinに結合する蛋白として知られているが、その詳しい機能は不明である。我々は、これまでratを用いた実験系を有しているため、まずrat triadin cDNAの抽出から始めた。核酸配列の決定されているrabbit RNAからRT-PCR法によりrabbit cardiac triadinを合成。これをprobeにしてrat heart cDNAlibraryをscreeningし、rat cardiac triadin cDNAを1つ抽出した。このcDNAは3^1末端が欠けていたため、3^1RACE法によりこの遺伝子の3^1側を抽出した。これらcDNAの核酸配列から3つのisoformが存在することが判った。一方、Northern blotでは心室に2つのbandを認めた。高血圧心肥大のモデルとしての圧負荷肥大心では、2つのbandのうち分子量の大きいisoformのみ、mRNAの発現が増加した。心臓内部位発現の検討では、心房において心室のtriadinと分子量の異なる3つのisoformが観察された。発生の経過中のisoform変化を観察したところ、心室はisoform発現に変化はなかった。胎児期の心房は心室と同じisoformを示したが、adult ratの心房は心房特有のisoformに変化していた。心房と心室の心筋細胞では筋小胞体の形態が異なると言われており、triadinのisoformの存在との関連が興味深い。次に、triadin機能の解明について、当初はantisenseを用いてその機能を検討する予定であったが、最近の遺伝子導入技術の進歩からadenovirusを用いた、negative domonant法を計画し、機能および分子構造との関連について実験を試行中である。triadinのgenomeはreverse PCRによりtriadin promoterの抽出を繰り返したが成功しなかった。現在、rat genomic libraryによりtraidinのgenomeを抽出している。

The function of Ca in the regulation of protein triadin in muscle cells was investigated. Triadin is a ryanodine receptor that binds to a protein whose function is unknown. The rat triadin cDNA was extracted from the genome. RNA alignment determination by RT-PCR and synthesis of rabbit cardiac triadin The rat heart cDNA library is screened and the rat cardiac triadin cDNA is extracted. The cDNA was extracted from the 3^1-terminal region by RACE. This cDNA sequence is not found in the isoform. One side, Northern blot High blood pressure heart hypertrophy, high blood pressure heart hypertrophy The study of the occurrence of triadin in the heart, atrium, ventricle and molecular weight was carried out. The isoform changes in the development process, and the isoform changes in the ventricle. Fetal atria and ventricles isoform, adult rat and atria isoform The relationship between triadin and isoform is interesting. Next, triadin function explanation, original antisense application, function evaluation, recent progress in gene introduction technology, adenovirus application, negative dominant method, function and molecular structure association, trial implementation. Triadin gene reverse PCR, triadin promoter and extraction Now, rat genomic library is available.