心筋障害における心筋内遺伝子転写調節機構の解析(サイトカインによる心筋内局所急性期反応)

心肌损伤中心肌内基因转录调控机制分析（细胞因子诱导的心肌局部急性时相反应）

• 批准号: 08770524
• 负责人: 奥村 敏
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770524/
• 关键词: ヘモペキシン; 初代培養心筋培養; インターロイキン6; CATアッセイ; 低酸素刺激; トランスフェクション; 転写調節領域

平成8年度は、以下の2点に着目して実験を行った。1)Rat genomic libraryより単離したHemopexin遺伝子の転写開始点上流約2.4kb(kilobases)をCAT vectorにサブクローニングし、新生児ラット初代培養心筋細胞でCAT assayを行い、心筋細胞内でのHemopexin遺伝子のプロモーター活性の程度を検討する。2)肝細胞(HepG2細胞,Hep3B細胞)を用いた実験で同定したHemopexin遺伝子の転写開始点上流-178/-158の領域に存在するInterleukin-6(Il-6)response element(Bioshem.Biophys.Res.Commun.185.420-429,1992,J.Biol.Chem.269.12654-12661,1994)の心筋細胞内での活性、特に低酸素刺激(95% N_2-5% CO_2)で初代培養心筋細胞内に誘導される内因性Il-6(Circulation 91.1520-1524,1995)に対する反応性を検討する。なお2)の実験を行うにあたり、対象としているIl-6 response elementの活性は単独では低いことが肝細胞を用いた実験で証明されているためIl-6 response elementの塩基配列に相同のoligonucleotideを作成しpA10 CAT2内のSV40プロモーターの上流にIl-6 response elementがtandemに6個連結するCAT constructを作成して実験を行った。実験結果から、Hemopexin遺伝子は心筋細胞内でも発現に十分なプロモーター活性を示すことが明らかになった。しかしIl-6 response elementをSV40プロモーターの上流にtandemに6個連結したpA10 CAT2の転写活性は低酸素刺激(95% N_2-5% CO_2)の有無にかかわらず同程度であった。以上の結果および共同研究者の長江が報告したマクロファージの培養上清により心筋細胞内のHemopexin遺伝子の発現量が約3倍に上昇する結果(Jpn.Circ.J.58.Sopplement 1 pp196,1994)を考えるとHemopexin遺伝子の発現調節には虚血再灌流時に誘導される心筋細胞由来の内因性Il-6に加え、マクロファージ等から産生される外因性Il-6関与が必要であることが示唆される。現在外因性Il-6のIl-6 response elementに対する反応性について検討を行っている。

Pingcheng 2008, the following "2: 00" focus on the production line. 1) the starting point of the Rat genomic library remote Hemopexin cluster is about 2.4kb (kilobases), the CAT vector cluster, the new cell, the CAT assay cell, the Hemopexin cell, the cell. 2) HepG2 HepG2 (Il-6) response element (Bioshem.Biophys.Res.Commun.185.420-429) response element (Bioshem.Biophys.Res.Commun.185.420-429) 1992 J.Biol.Chem.269.12654-12661, 1994) the activity of intracellular Il-6, the activity of intracellular Il-6 induced by low-acid stimulation (95% NO2-5% NO2), the primary culture of cardiac muscle (Circulation 91.1520-1524, 1995), and the reversal effect. (2) in this case, you can use the same oligonucleotide file to make the same oligonucleotide file for the pA10 CAT2 SV40 license, and the six link CAT construct for the upstream Il-6 response element and tandem in the pA10 CAT2 will be made into a free-of-the-box CAT construct. The results showed that there was a significant increase in the activity of Hemopexin in the cells. For example, Il-6 response element, SV40, pA10 CAT2, tandem, 6 link, pA10 CAT2, write activity, low acid stimulation (95% NO2-5% CO_2), low acid stimulation, low acid stimulation. The results above were reported by the co-researchers of Changjiang University. The results showed that the intracellular concentration of Hemopexin in the supernatant was about 3 times higher than that in the supernatant (Jpn.Circ.J.58.Sopplement 1 pp196,1994). The results showed that the heart muscle cells were caused by the increase of endogenous Il-6 and the cause of heart failure during blood deficiency and reperfusion. Please give birth to the external cause of Il-6 and the necessary cause. At present, there is an external cause of Il-6, Il-6 response element, anti-sex, anti-sex, anti-sex and anti-sex.

项目成果

奥村 敏: "ヘモペキシン遺伝子の心筋内発現及びサイトカインによる発現調節機構の解析"

Satoshi Okumura：“血红素结合蛋白基因心肌内表达及其细胞因子表达调控机制分析”

奥村 敏: "心筋障害モデルにおけるAntioxidant・Hemopexinの心筋内発現調節機構の解析"

Satoshi Okumura：“心肌损伤模型中抗氧化剂/血红素结合蛋白心肌内表达的调控机制分析”