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心筋障害における心筋内遺伝子転写調節機構の解析(サイトカインによる心筋内局所急性期反応)

心肌损伤中心肌内基因转录调控机制分析（细胞因子诱导的心肌局部急性时相反应）

基本信息

批准号：
08770524
负责人：
奥村敏
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成8年度は、以下の2点に着目して実験を行った。1)Rat genomic libraryより単離したHemopexin遺伝子の転写開始点上流約2.4kb(kilobases)をCAT vectorにサブクローニングし、新生児ラット初代培養心筋細胞でCAT assayを行い、心筋細胞内でのHemopexin遺伝子のプロモーター活性の程度を検討する。2)肝細胞(HepG2細胞,Hep3B細胞)を用いた実験で同定したHemopexin遺伝子の転写開始点上流-178/-158の領域に存在するInterleukin-6(Il-6)response element(Bioshem.Biophys.Res.Commun.185.420-429,1992,J.Biol.Chem.269.12654-12661,1994)の心筋細胞内での活性、特に低酸素刺激(95% N_2-5% CO_2)で初代培養心筋細胞内に誘導される内因性Il-6(Circulation 91.1520-1524,1995)に対する反応性を検討する。なお2)の実験を行うにあたり、対象としているIl-6 response elementの活性は単独では低いことが肝細胞を用いた実験で証明されているためIl-6 response elementの塩基配列に相同のoligonucleotideを作成しpA10 CAT2内のSV40プロモーターの上流にIl-6 response elementがtandemに6個連結するCAT constructを作成して実験を行った。実験結果から、Hemopexin遺伝子は心筋細胞内でも発現に十分なプロモーター活性を示すことが明らかになった。しかしIl-6 response elementをSV40プロモーターの上流にtandemに6個連結したpA10 CAT2の転写活性は低酸素刺激(95% N_2-5% CO_2)の有無にかかわらず同程度であった。以上の結果および共同研究者の長江が報告したマクロファージの培養上清により心筋細胞内のHemopexin遺伝子の発現量が約3倍に上昇する結果(Jpn.Circ.J.58.Sopplement 1 pp196,1994)を考えるとHemopexin遺伝子の発現調節には虚血再灌流時に誘導される心筋細胞由来の内因性Il-6に加え、マクロファージ等から産生される外因性Il-6関与が必要であることが示唆される。現在外因性Il-6のIl-6 response elementに対する反応性について検討を行っている。

The following two points were pointed out in Heisei 8: 1)Rat genomic library: about 2.4kb(kilobases) upstream of Hemopexin gene start point; CAT vector; CAT assay in neonatal primary cultured cardiac muscle cells; Hemopexin gene activity in cardiac muscle cells. 2)hepatocyte (HepG2 cells, Hep3B cells) Interleukin-6(Il-6)response element exists in the domain of-178/-158 at the start point of Hemopexin gene writing.(Bioshem.Biophys.Res.Commun.185.420-429,1992,J.Biol.Chem.269.12654-12661,1994) In particular, endogenous IL-6(Circulation 91.1520-1524,1995) was induced in primary cultured cardiac muscle cells by low-acid stimulation (95% N_2-5% CO_2), and the response was discussed. 2) The activity of Il-6 response element is low, and the CAT construct of Il-6 response element is high. The results showed that Hemopexin gene was very active in cardiac muscle cells. The activity of CAT2 in response element SV40 is similar to that in response element SV 40. The above results are consistent with those reported by co-investigators. Hemopexin gene production in cultured supernatant of cardiac muscle cells increased approximately 3-fold.(Jpn.Circ.J.58.Sopplication 1 pp196,1994) The regulation of Hemopexin gene expression induced by reperfusion of deficient blood is related to the endogenous IL-6 gene expression and the exogenous IL-6 gene expression. Now extrinsic Il-6 and Il-6 response elements are considered to be reactive.