ヒトsmall maf遺伝子のクローニング

【本研究の背景】組織特異的転写因子NF-E2は、巨核球と赤芽球の分化・成熟に、重要な働きをしている。その小サブユニットであるsmall maf原癌遺伝子ファミリーは、ロイシンジッパー・DNA結合タンパクをコードしているが、ヒトのホモログについては遺伝子構造が明らかになっていない。【本研究の目的】ヒトのsmall maf転写因子をコードする遺伝子の単離と構造決定および、遺伝子座を決定すること。【研究によって得られた知見・成果】[1.ヒトsmall maf転写因子群の遺伝子の単離]まず、ヒトmafKおよびmafGのcDNAを単離した。これをもとに、PCR用プライマーをデザインし、P1ファージ・ヒト遺伝子ライブラリーをPCR法でスクリーニングし、mafKおよびmafGの遺伝子を単離することができた。mafK、mafGともにORFは第二・三エクソンに存在し、非翻訳領域のみからなる第一エクソンは第二エクソンより、mafKで約8kb,mafGで約4.5kb上流に存在することを明らかにした。[2.ヒトsmall maf転写因子群の遺伝子座の決定]得られた遺伝子をプローブとして、FISH法にて、mafKは第7番染色体短腕に、mafGは17番染色体長腕に存在することを明らかにした。[3.各small maf転写因子のプロモーターの解析]赤芽球系および巨核球系の分化に伴って、mafKのプロモーターの活性化が認められた。プロモーターの構造との関係は、現在検索中である。

【本研究の背景】組織特異的転写因子NF-E2は、巨核球と赤芽球の分化・成熟に、重要な働きをしている。その小サブユニットであるsmall maf原癌遺伝子ファミリーは、ロイシンジッパー・DNA結合タンパクをコードしているが、ヒトのホモログについては遺伝子構造が明らかになっていない。【本研究の目的】ヒトのsmall maf転写因子をコードする遺伝子の単離と構造決定および、遺伝子座を決定すること。【研究によって得られた知見・成果】[1.ヒトsmall maf転写因子群の遺伝子の単離]まず、ヒトmafKおよびmafGのcDNAを単離した。これをもとに、PCR用プライマーをデザインし、P1ファージ・ヒト遺伝子ライブラリーをPCR法でスクリーニングし、mafKおよびmafGの遺伝子を単離することができた。mafK、mafGともにORFは第二・三エクソンに存在し、非翻訳領域のみからなる第一エクソンは第二エクソンより、mafKで約8kb,mafGで約4.5kb上流に存在することを明らかにした。[2.ヒトsmall maf転写因子群の遺伝子座の決定]得られた遺伝子をプローブとして、FISH法にて、mafKは第7番染色体短腕に、mafGは17番染色体長腕に存在することを明らかにした。[3.各small maf転写因子のプロモーターの解析]赤芽球系および巨核球系の分化に伴って、mafKのプロモーターの活性化が認められた。プロモーターの構造との関係は、現在検索中である。