銅転送ATPaseの脳での局在とMenkes病の中枢神経障害の解析

脑内铜转移 ATP 酶的定位及门克斯病中枢神经系统疾病的分析

• 批准号: 08770579
• 负责人: 飯塚 雄俊
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770579/
• 关键词: Menkes病; macularマウス; 銅転送ATPase; mottled gene

正常マウスおよびMenkes病モデルマウスであるmaclarマウス脳でのMenkes病の病因遺伝子(マウスではmotteled gene)の発現をノーザンブロットおよびin situ hybridization法で検討した。方法 1)正常およびmacularマウスの脳組織からRNAを抽出し、ノーザンハイブリダイゼーションをmottled cDNAから作成した^<32>P標識DNAプローブを用いて行なった。2)Mottled cDNAからDIG標識RNAプローブを作成し、正常およびmacularマウスの脳組織切片上でin situ hybridizationを行った後、AP標識抗DIG抗体で染色し、mottled mRNAを検出した。結果および考察1)ノーザンブロット法において正常とmacularマウスでは位置、強度ともに差はなかった。2)In situ hybridization法で、正常マウスの大脳では海馬の錯体細胞、脈絡叢上皮細胞で強く検出され、また小脳においてはPurkinje細胞および顆粒細胞が強く染色された。すなわち、これらの細胞ではMenkes ATPaseが発現し、細胞内銅輸送に関与していることを示唆する結果であった。しかし、血管内皮細胞やアストロサイトはほとんど染色されなかった。Macularマウス脳でも正常と同様に海馬の錯体細胞、脈絡叢上皮細胞、Purkinje細胞および顆粒細胞が強く染色された。今回、望ましい抗体が入手できず、免疫組織学的検討はできなかったが、macularマウスで検出されたmottled mRNAは正常なMenkes蛋白を合成していないと考えられた。Menkes病患者ではPurkinje細胞や海馬の錯体細胞の障害が特に強く、今回の結果はこの病状と一致していた。

The development of the pathogenic gene of Menkes disease is discussed by the method of reverse transcription and in situ hybridization Method 1: <32>DNA extraction from normal tissue 2)Mottled cDNA was produced from the DIG marker RNA, and then the AP marker was stained for anti-DIG antibodies after situ hybridization on tissue sections from normal and macular tissues. Results: 1) The method is normal and the intensity is poor. 2)In situ hybridization method, normal cells, hippocampus, choroid plexus epithelial cells, Purkinje cells, granular cells, and small cells were strongly stained. Menkes ATPase is found in the cells, and intracellular copper transport is associated with the results. The blood vessel endothelial cells were stained with white dye. Macular cells, choroid plexus epithelial cells, Purkinje cells and granular cells were strongly stained. Now, we want to start with antibodies. Immunohistological studies show that mottled mRNA is synthesized normally. Menkes disease patients are particularly vulnerable to Purkinje cells and hippocampal malformations, and the results are consistent with their symptoms.

项目成果

村田佳子・上入本達也・中村全克・飯塚雄俊・児玉浩子・阿部敏明・高橋一郎: "MacularマウスでのATP7A遺伝子発現の検討" Biomedical Research on Trace elements (Japan). 7・3. 35-36 (1996)

Yoshiko Murata、Tatsuya Ueirimoto、Masakatsu Nakamura、Yutoshi Iizuka、Hiroko Kodama、Toshiaki Abe、Ichiro Takahashi：“黄斑小鼠中 ATP7A 基因表达的检查”微量元素生物医学研究（日本）35-36。