Wilson病タンパクにおけるポリクローナル抗体を用いた肝細織細胞内局在の検討

使用多克隆抗体研究威尔逊病蛋白的细胞内定位

• 批准号: 08770594
• 负责人: 山口 之利
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770594/
• 关键词: Wilson病; ポリクローナル抗体; HepG2細胞; Western Blotting

Wilson病タンパクの推定上の第4-6銅結合部位に対するポリクロナール抗体を用いて、細胞内における同タンパク局在について検討した。1)培養肝細胞を用いた検討ヒト肝臓由来であるHepG2細胞を用いたWestern Blottingにおいて、およそ160kDaのところにバンドを認めた。このバンドはWilson病タンパクにてあらかじめpre-blockingした特異抗体を用いてBlottingを行うと認められなかった。また、HepG2細胞の融解上清を0.7-1.5モルのSucroseおよび20%のPercoll gradient液にのせ超遠心したものを12分画し各分画に対してこの特異抗体にてWestern Blottingを行った。各分画においてWilson病タンパクはほぼゴルジ体からエンドソーム領域に同様の160kDaのバンドが認められた。またこのバンドは上記pre-blokingを行った抗体によるWestern Blottingにおいても消失しその特異性が認められた。コントロールとしてRibopholin(γ-ER),Mannose-6-phosphate receptorに対する抗体を作用させたところ予想される分画に各々のバンドが認められ、このgradient gelの正確性も確認された。免疫蛍光抗体染色において、Wilson病タンパクは主にゴルジ体からエンドソームにかけて分布が認められ、Western Blottingと同様の結果を示した。2)患者肝組織を用いた検討現在、点突然変異の認められたWilson病患者の肝組織細胞について検討中である。

Wilson disease タ ン パ ク の presumption of 4 to 6 copper の combining parts に す seaborne る ポ リ ク ロ ナ ー を ル antibody with い て, intracellular に お け る with タ ン パ ク bureau in に つ い て beg し 検 た. 1) develop hepatocellular を with い た beg ヒ 検 ト routine liver origin で あ る HepG2 cells を using い た Western Blotting に お い て, お よ そ 160 kda の と こ ろ に バ ン ド を recognize め た. こ の バ ン ド は Wilson disease タ ン パ ク に て あ ら か じ め pre - blocking し を た specific antibody with い て Blotting を line う と recognize め ら れ な か っ た. ま た の melting, HepG2 cells supernatant を 0.7 1.5 モ ル の Sucrose お よ び 20% の Percoll gradient liquid に の せ buzzer-beaters heart し た も の を 12 points paint し each に し seaborne て こ の specific antibodies に て Western Blotting を line っ た. Each painting に お い て Wilson disease タ ン パ ク は ほ ぼ ゴ ル ジ body か ら エ ン ド ソ ー に ム field with others in 160 kda の の バ ン ド が recognize め ら れ た. ま た こ の バ ン ド は written pre - bloking を line っ た antibody に よ る Western Blotting に お い て も disappear し そ の specificity が recognize め ら れ た. コ ン ト ロ ー ル と し て Ribopholin (gamma - ER), Mannose - 6 - phosphate receptor に す seaborne る antibody を role さ せ た と こ ろ to think さ れ る points draw に each 々 の バ ン ド が recognize め ら れ, こ の gradient gel の correctness も confirm さ れ た. Immune antibody staining 蛍 light に お い て, Wilson disease タ ン パ ク は main に ゴ ル ジ body か ら エ ン ド ソ ー ム に か け て distribution が recognize め ら れ, Western Blotting と with others を の results shown し た. 2) in patients with liver tissue を with い た 検 for now, all of a sudden - different の recognize め ら れ た Wilson disease の liver tissue cells に つ い て 検 beg in で あ る.

项目成果

青木継稔,鈴木真理子,山口之利,清水教一: "遺伝性銅代謝異常症とP-Type ATPase 銅輸送蛋白" Bicmed Res Trace Elements. 7(2). 1-10 (1996)

Tsugutoshi Aoki、Mariko Suzuki、Yutoshi Yamaguchi、Kyoichi Shimizu：“遗传性铜代谢紊乱和 P 型 ATP 酶铜转运蛋白”Bicmed Res 微量元素 7(2)。

山口之利,青木継稔: "Wilson病およびMenles病の遺伝子異常と病因" 小児科. 37(7). 817-824 (1996)

Yoshitoshi Yamaguchi、Tsugutoshi Aoki：“威尔逊病和门莱斯病的遗传异常和发病机制”儿科学 37(7) (1996)。